[发明专利]用于鉴定细鳞鲑遗传性别的微卫星标记引物对及性别鉴定方法在审
| 申请号： | 202210140776.8 | 申请日： | 2022-02-16 |
| 公开（公告）号： | CN114480671A | 公开（公告）日： | 2022-05-13 |
| 发明（设计）人： | 佟广香;刘冰;宋建臣;刘福祥;韩世成;马凯;匡友谊 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所;内蒙古引绰济辽供水有限责任公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6879;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 哈尔滨市文洋专利代理事务所(普通合伙) 23210 | 代理人： | 范欣 |
| 地址： | 150000 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 鉴定 细鳞鲑 遗传性 别的 卫星 标记 引物 性别 方法 | ||
1.用于鉴定细鳞鲑遗传性别的微卫星标记引物对，其特征在于该引物对中上游引物F的序列为5’-CACCCACACACGTACCAGTC-3’，该引物对中下游引物R的序列为5’-TGTGGAGTTCATGTGGGATG-3’。
2.细鳞鲑遗传性别的鉴定方法，其特征在于该鉴定方法步骤如下：
一、提取待鉴定细鳞鲑的DNA；
二、PCR反应；PCR反应体系中扩增引物为权利要求1所述微卫星标记引物对；上游引物F的序列为5’-CACCCACACACGTACCAGTC-3’，下游引物R的序列为5’-TGTGGAGTTCATGTGGGATG-3’；
三、琼脂糖凝胶电泳检测，扩增结果为0条带的是雌鱼，扩增结果为1条带的是雄鱼。
3.根据权利要求2所述的细鳞鲑遗传性别的鉴定方法，其特征在于步骤二PCR反应体系中还加入细鳞鲑18s核糖体RNA参照引物对；
细鳞鲑18s核糖体RNA参照引物对中的上游引物18SF为5’-GGTCCGAAGCGTTTACTTTG-3’，下游引物18SR为5’-ACCTCTAGCGGCACAATACG-3’；
步骤三、琼脂糖凝胶检测，扩增结果为1条带的是雌鱼，扩增结果为2条带的是雄鱼。
4.根据权利要求3所述的细鳞鲑遗传性别的鉴定方法，其特征在于步骤二PCR反应体系为20μl，由10μl 2×PCR Dream Taq master mix、1μl DNA、10μM微卫星标记引物对上游引物F和下游引物R各1μl、1μM的细鳞鲑18s核糖体RNA参照引物对上下游引物各1μl及余量的无酶无菌水组成。
5.根据权利要求4所述的细鳞鲑遗传性别的鉴定方法，其特征在于步骤二PCR反应条件：95℃预变性3min；95℃变性30s、64℃退火30s、72℃延伸30s，30个循环；最后72℃延伸5min。
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