[发明专利]用于鉴定细鳞鲑遗传性别的微卫星标记引物对及性别鉴定方法

说明书

用于鉴定细鳞鲑遗传性别的微卫星标记引物对及性别鉴定方法，涉及一种鉴定鱼类性别的微卫星标记引物对及性别鉴定方法。本发明微卫星标记引物对中上游引物F的序列为5’‑CACCCACACACGTACCAGTC‑3’，该引物对中下游引物R的序列为5’‑TGTGGAGTTCATGTGGGATG‑3’。性别鉴定方法：一、提取待鉴定细鳞鲑的DNA；二、PCR反应；三、琼脂糖凝胶电泳检测。本发明方法通过PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳条带判断雌、雄，仅需提取DNA样本，可以采集鳍条或鳞片提取DNA，对鱼体伤害小，无需杀鱼，能够用于早期性别鉴定。

技术领域

本发明涉及一种鉴定鱼类性别的微卫星标记引物对及性别鉴定方法。

背景技术

细鳞鲑Brachymystax lenok(Pallas)，属鲑形目(Salmoniformes)、鲑科(Salmonidae)，细鳞鱼属(Brachymystax)是我国珍稀、名贵的冷水性鱼类，1998年被列入中国濒危动物红皮书，濒危等级为濒危，2021年野外种群被列为国家二级保护动物。

细鳞鲑3～5龄性成熟，性成熟时无第二性征，繁殖季节难以通过外形鉴定性别。细鳞鲑属于珍稀名贵冷水性鱼类，野生资源匮乏，以往鉴定性别需要取性腺，做石蜡切片，过程繁琐，需要杀鱼，而且不能鉴定性腺未发育的小鱼。鉴于以往鉴定性别方法需要杀鱼，但在野生调查过程中，不能将所有的鱼均取性腺，鉴定性别，尤其是细鳞鲑为国家二级保护动物，因此不能全面了解野生鱼性比情况。养殖过程中虽然细鳞鲑雌、雄生长差异较小，但细鳞鲑的卵粒大，与大西洋鲑相似，并且鱼卵营养丰富，可以用来做鱼子酱，商品价值远远超过雄鱼，且性成熟的细鳞鲑雄鱼精液多，人工繁殖时1尾雄鱼的精液能与3～5尾细鳞鲑雌鱼配组，因此商品鱼养殖及后备亲鱼培育时需要优化雌、雄比例，避免饲养过多的雄鱼，造成不必要的浪费。

发明内容

为更有效的在早期鉴别细鳞鲑遗传性别，本发明提供了一种用于鉴定细鳞鲑遗传性别的微卫星标记引物对及性别鉴定方法。

本发明用于鉴定细鳞鲑遗传性别的微卫星标记引物对，其中该引物对中上游引物F的序列为5’-CACCCACACACGTACCAGTC-3’，该引物对中下游引物R的序列为5’-TGTGGAGTTCATGTGGGATG-3’。

细鳞鲑遗传性别的鉴定方法：

一、提取待鉴定细鳞鲑的DNA；

二、PCR反应；PCR反应体系中扩增引物为上述微卫星标记引物对；上游引物F的序列为5’-CACCCACACACGTACCAGTC-3’，下游引物R的序列为5’-TGTGGAGTTCATGTGGGATG-3’；

三、琼脂糖凝胶电泳检测，扩增结果为0条带的是雌鱼，扩增结果为1条带的是雄鱼。

其中，雄鱼所扩增的条带为278bp。

本发明能够简单、快速的鉴定细鳞鲑遗传性别，仅需琼脂糖电泳，无需测序，省时、省力。

本发明方法通过PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳条带判断雌、雄，仅需采集鳍条或鳞片样本提取DNA，对鱼体伤害小，无需杀鱼，能够用于早期性别鉴定。

附图说明

图1是实施例1中雌、雄细鳞鲑样本鉴定结果图，图中M泳道为DNA marker。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。