[发明专利]一种口服55型腺病毒疫苗制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种口服55型腺病毒疫苗制备方法及应用，所述制备方法具体为：55型腺病毒源分离自感染者咽拭子标本，采用HEp‑2细胞培养法进行分离培养，利用无血清悬浮培养的Vero细胞，培养至5×10⁶cells/mL，接种55型腺病毒，培养至75%以上的细胞出现典型细胞病变效应时，收集培养液，将培养液采用离心和超滤法进行纯化；所述应用为制备所得疫苗能够被应用到55型腺病毒免疫方面。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体的说，一种口服55型腺病毒疫苗制备方法及应用。

背景技术

人腺病毒（human adenovirus，HAdV）是一类无包膜的双链DNA病毒，分为A-G 7个血清学组，其中B组腺病毒感染目前己成为急性呼吸系统疾病的重要因素。B组又可分为B1和B2亚组，B1主要包括3、7、16、21、51型；B2包括14、34、35及55型。近年来，HAdV-55是成人社区获得性肺炎的重要病因之一，在儿童呼吸道感染中也占有一定比例，可引起校园、社区等聚集性传播。腺病毒感染没有特效药物及疗效显著的治疗方法，目前也没有疫苗进行预防，主要依靠机体自身免疫系统消灭病毒而痊愈。先前的研究已表明，机体产生的腺病毒抗体对同型腺病毒具有长久而稳定的保护性。因此，开发高效、安全低价的腺病毒疫苗是预防腺病毒感染的有效方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种口服55型腺病毒疫苗制备方法及应用，所述制备方法能够制备出口服进行免疫55型病毒的口服55型腺病毒疫苗，所述应用能够将制备所得的口服55型腺病毒疫苗进行55型腺病毒的免疫，且直接采用口服的模式进行免疫。

本发明通过下述技术方案实现：一种口服55型腺病毒疫苗制备方法，包括下述步骤：

1）从感染者咽拭子标本中分离出55型腺病毒源，采用HEp-2细胞培养法进行分离培养；

2）55型腺病毒的无血清培养；

3）55型腺病毒的纯化。

进一步的为更好地实现本发明所述的一种口服55型腺病毒疫苗制备方法，特别采用下述设置方式：所述步骤1）包括下述具体步骤：

1.1）体外培养HEp-2细胞，传代培养3次，采用生长状态良好的HEp-2细胞接种24孔板，接种密度1.5×10⁵个/孔，在37 ℃ 5% CO₂孵箱中培养18~24h；

1.2）弃去细胞培养基，用PBS洗涤细胞3次，每孔加入300μl含2%FBS的RPIM 1640培养基，并加入咽拭子标本100μl/孔，置于37℃ 5% CO₂饱和湿度孵箱内孵育6 h，弃去孵育液，更换为含2%FBS的RPIM 1640培养基500μL；

1.3）持续培养并逐日观察细胞生长状态，当75%以上的细胞出现典型细胞病变效应（CPE）时，收集细胞上清，5000×g离心5min去除细胞碎片，取上清病毒液保存。

进一步的为更好地实现本发明所述的一种口服55型腺病毒疫苗制备方法，特别采用下述设置方式：所述步骤2）具体为：将步骤1）所得利用无血清悬浮培养的Vero细胞，培养至5×10⁶cells/mL，接种55型腺病毒，培养至75%以上的细胞出现典型细胞病变效应时，收集培养液。

进一步的为更好地实现本发明所述的一种口服55型腺病毒疫苗制备方法，特别采用下述设置方式：所述步骤3）包括下述具体步骤：

3.1）取步骤2）所得，以5000×g离心力离心5min，用移液管吸取离心后的上清，加入10000MWCO超滤管中，以5000×g离心力离心20min；

3.2）在步骤3.1）的浓缩液中加入无菌PBS至原体积；

3.3）经步骤3.2）后，以5000×g离心力离心20min；

3.4）重复步骤3.2）、步骤3.3）3次，吸取浓缩液于无菌管中，即得到纯化的55型腺病毒。