[发明专利]一种快速检测粮食中玉米赤霉烯酮毒素含量的方法

权利要求书

1.一种快速检测粮食中玉米赤霉烯酮毒素含量的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)样品的处理：称取10.00g被测粮食样品于100mL具塞锥形瓶中，加入20mL提取液，用涡旋振荡器振荡1～2min，静置，于2000～4000r/min离心1min，得上清液，取100μL上清液，得到待检测的样品；

(2)胶体金试纸条的制备：将ZEN半抗原通过活泼酯法分别与BSA和OVA偶联，得到ZEN的偶联物ZEN-BSA和ZEN-OVA，利用ZEN-BSA作为免疫原制备抗ZEN的单克隆抗体，将制得的胶体金溶液标记经过透析除盐处理的抗ZEN的单克隆抗体，并将其喷涂到金标垫上，将ZEN-OVA喷涂到T线，兔抗鼠单克隆抗体喷涂到C线，组装成试纸条，干燥，得到检测所需的胶体金试纸条；

(3)样品的检测：将胶体金试纸条、质控样品从2～8℃的温度中取出，在室温下放置1～2h，直到温度在20～25℃，将孵育器预热至35～45℃，将检测条平放在孵育器凹槽中，打开加样孔，用微量移液器移取300μL待测溶液，加入到检测条加样孔中，关闭加样孔及孵育器盖，孵育5min取出试纸条，2min内用胶体金读数仪读取结果，得到被测粮食中玉米赤霉烯酮毒素的含量。

2.根据权利要求1所述的一种快速检测粮食中玉米赤霉烯酮毒素含量的方法，其特征在于：步骤(2)所用的胶体金溶液的制备方法为：准确称取99～110g的超纯水于三口瓶中，油浴加热，然后加入0.5mL2％(w/v)的氯金酸溶液，快速搅拌至均匀，待溶液沸腾后一次性地加入1.45mL的1％(w/v)柠檬酸三钠，搅拌30min并回流至溶液颜色由浅黄色变为紫红色，当溶液颜色稳定时，停止加热，继续慢速搅拌20min，自然冷却至室温，制备得到检测所需的胶体金溶液。

3.根据权利要求1所述的一种快速检测粮食中玉米赤霉烯酮毒素含量的方法，其特征在于：步骤(2)所述标记具体为：在搅拌的条件下，向胶体金溶液中加入单克隆抗体，使其终浓度达到40ug/mL，25℃下孵育5min，用0.1mol/L K₂CO₃调节胶体金溶液的pH为9.0，然后加入10％BSA至BSA的终浓度为0.1％(w/v)，10000rpm离心20min，弃上清液，再用0.01mM pH为9.0的Tris缓冲液恢复，重复1次，之后将沉淀重悬于原体积的1/10的0.01mM pH为9.0的Tris缓冲液中，最后加入10％(w/v)BSA至BSA的终浓度为0.1％，4℃储存备用。

4.根据权利要求1所述的一种快速检测粮食中玉米赤霉烯酮毒素含量的方法，其特征在于：离心机的转速为2500～4000r/min。

5.根据权利要求1所述的一种快速检测粮食中玉米赤霉烯酮毒素含量的方法，其特征在于：干燥为37℃烘箱干燥。

6.根据权利要求1所述的一种快速检测粮食中玉米赤霉烯酮毒素含量的方法，其特征在于：胶体金试纸条、质控样品的冷藏温度为4～8℃。

7.根据权利要求1所述的一种快速检测粮食中玉米赤霉烯酮毒素含量的方法，其特征在于：孵育器的预热温度为38～45℃。