[发明专利]一种快速检测粮食中玉米赤霉烯酮毒素含量的方法

说明书

一种快速检测粮食中玉米赤霉烯酮毒素含量的方法属于检测技术领域，该方法包括以下步骤：(1)称取10.00g被测粮食样品于100mL具塞锥形瓶中，加入20mL提取液，振荡、静置，离心1min，得上清液，取上清液，得到待检测的样品；(2)胶体金试纸条的制备；(3)样品的检测：将胶体金试纸条、质控样品在室温下放置1～2h，直到温度在20～25℃，将孵育器预热至35～45℃，将检测条平放在孵育器凹槽中，打开加样孔，用微量移液器移取300μL待测溶液，加入到检测条加样孔中，关闭加样孔及孵育器盖，孵育5min取出试纸条，2min内用胶体金读数仪读取结果，得到被测粮食中玉米赤霉烯酮毒素的含量。

技术领域

本发明属于检测技术领域，主要涉及一种快速检测粮食中玉米赤霉烯酮毒素含量的方法。

背景技术

霉菌毒素是真菌在生长过程中产生的有毒次级代谢产物，全球每年约有1/4的粮食受到霉菌毒素的污染，造成的经济损失达数千亿美元。粮食作为人类食物中最主要的能量供给原料，其加工品的食用安全问题引起社会广泛关注。目前已知的真菌毒素有300多种，粮食中的真菌毒素常见的有玉米赤霉烯酮(zearalenone，ZEN)、呕吐毒素(vomitoxin，脱氧雪腐镰刀菌烯醇deoxynivalenol,DON)、黄曲霉毒素(aflatoxin，AFT)、赭曲霉毒素(ochratoxin，OTA)、烟曲霉毒素(fumonisin，FUM)等，它们可通过饲料或食品进入人和动物体内导致中枢神经系统、免疫系统、生殖器官等多系统器官的损伤，部分毒素还具有致癌、致畸和致突变的毒害作用。

玉米赤霉烯酮(ZEN)，又常被称作F2毒素，是一种非甾体霉菌毒素，主要由禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)和粉红镰刀菌(Fusarium roseum)产生，是目前全世界之中污染范围最为广泛的一种镰刀菌毒素。首先，从赤霉病玉米中分离，玉米赤霉烯酮广泛存在于霉变的玉米、高粱、小麦等谷类作物。玉米赤霉烯酮病毒的结构与动物内源雌激素相似，所以可与始激素受体结合而显示出弱雌激素活性。根据实验表明，该病毒所具有的类雌激素作用有可能导致动物雌激素亢进症，进一步造成动物流产、死胎等生殖机能异常，并且对免疫系统有潜在的毒害作用，还可能会导致免疫抑制、生长下降、不育以及畸形等问题，其中，猪尤其对该病毒最为敏感。

粮食在受到玉米赤霉烯酮大范围污染后，不仅严重制约了农业经济，也在全球范围内带来严重的食品安全问题，也威胁到人类身体健康。现在全球已有很多国家制订了食品中关于ZEN的限量标准，以预防玉米赤霉烯酮对人和动物可能造成的危害。在我国规定，玉米赤霉烯酮在粮食中的含量，必须低于60μg/kg，饲料中ZEN含量必须低于500μg/kg。

目前，玉米赤霉烯酮在食品和饲料中含量的主要有以下几种分析方法：高效液相色谱法(HPLC)、薄层色谱法(TLC)、酶联免疫法(ELISA)以及液-质联用法(LCMS)、胶体金快速定量法等。其中高效液相色谱法(HPLC)、薄层色谱法(TLC)、酶联免疫法(ELISA)以及液-质联用法(LCMS)这四种方法。酶联免疫吸附实验由于液相中的抗原(或抗体)需经扩散才能与固相上的抗原或抗体反应，需较长时间，各个步骤需彻底地洗涤，并且需要特定的酶和底物显色，因此耗时长，程序繁琐；高效液相色谱法因其对检测样品、仪器及操作人员的要求，不利于基层常规检测使用。

胶体金快速定量法是以胶体金作为示踪标志物，应用抗原抗体反应的一种免疫标记技术。胶体金是由氯金酸(HAuC14)在还原剂如白磷、单宁酸/柠檬酸钠和柠檬酸三钠等作用下(本发明用的是柠檬酸三钠作为还原剂)，聚合成特定大小的金颗粒，由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，故称为胶体金。胶体金标记，实质上是蛋白质高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。吸附机理是胶体金颗粒表面的负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团因静电作用而形成牢固结合。这种球型的胶体金颗粒具有高电子密度，能够对多种生物高分子物质如葡萄球菌、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、BSA (牛血清白蛋白)等非共价结合，形成可见的紫红色，使其成为免疫反应的优良标记物，因此广泛应用于各种物质的检测。