[发明专利]一种用于菌群移植的肠道菌群凝胶剂制备方法

权利要求书

1.一种用于菌群移植的肠道菌群凝胶剂制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤S00菌群制备：收集健康供体新鲜粪便x份，按稀释比例溶解于y份的生理盐水中，再通过粪便分析前处理仪处理去除残渣，得到菌悬液D；

步骤S10凝胶基质制备：将海藻酸钠按照3％的添加量置于开水中使用电动搅拌机1600rpm搅拌30min至完全溶解，再加入营养底物继续搅拌10min至所有试剂完全溶解，后于高压灭菌锅121℃灭菌20min，得到凝胶基质E并冷却待用；

步骤S20凝胶剂制备：将步骤S00中得到的菌悬液D和步骤S10中得到的凝胶基质E按照质量比为5:1的比例混合，通过漩涡震荡仪搅拌均匀得到菌群凝胶剂F；

步骤S30产品获取：将步骤S20中得到的菌群凝胶剂F置于-20℃的冰箱中进行储存。

2.根据权利要求1所述一种用于菌群移植的肠道菌群凝胶剂制备方法，其特征在于：

还包括步骤S11：将步骤S10中冷却得到的凝胶基质E取样并观察性状，所需观察的性状包括粘度以及流动性。

3.根据权利要求1所述一种用于菌群移植的肠道菌群凝胶剂制备方法，其特征在于：

在步骤S10中所加入的营养底物包括：5％的葡萄糖、0.02％的维生素C和0.5％的山梨糖醇。

4.根据权利要求1所述一种用于菌群移植的肠道菌群凝胶剂制备方法，其特征在于：

还包括步骤S21凝胶剂检测：将步骤S20中得到的菌群凝胶剂F取样多份至不同的容器内，进行初始活菌率的测定。

5.根据权利要求4所述一种用于菌群移植的肠道菌群凝胶剂制备方法，其特征在于：

在步骤S21中，在对初始活菌率进行测定时，先将取样的菌群凝胶剂F稀释若干倍，用LIVE/DEAD^TMBacLight^TMBacterial Viability Kit染料对样本中的微生物进行染色，使用BD Accuri C6流式细胞仪进行观察并计数，使用BD AccuriTM C6 Plus Software软件分析样本的初始单位菌量和初始单位存活菌量。

6.根据权利要求1所述一种用于菌群移植的肠道菌群凝胶剂制备方法，其特征在于：

还包括步骤S31：将步骤S30中获取的产品于-20℃储存若干天后取样，于37℃的水浴锅中融化，稀释若干倍，通过流式细胞仪检测分析单位菌量和菌群活性。

7.根据权利要求6所述一种用于菌群移植的肠道菌群凝胶剂制备方法，其特征在于：

在步骤S31中菌群凝胶剂F取样所保存的天数分别为7天、14天以及30天。

8.根据权利要求6所述一种用于菌群移植的肠道菌群凝胶剂制备方法，其特征在于：

在步骤S31中同时使用QIAamp Fast DNA Stool Mini KIT(QIAGEN)试剂盒提取菌群凝胶剂样本的DNA，基于16S rRNA V3-V4区段进行PCR文库构建，通过Illumina HiSeq2500仪器进行高通量测序，借助生信分析平台通过Usearch进行OTU聚类分析以获得菌群丰度和组成信息。