[发明专利]一种用于菌群移植的肠道菌群凝胶剂制备方法

说明书

本发明提供一种用于菌群移植的肠道菌群凝胶剂制备方法，本制备方法制备出的菌群凝胶剂较于菌液具有黏稠度高、易制备、便于存储的优势。试验表明，在‑20℃条件下保存30天稳定性较好，菌群丰度变化不大。特别是对于菌群移植临床治疗中的一些特殊患者，可以作为一种提高肠道内菌群停留时间的剂型进行推广使用，提高治疗的效果。

技术领域

本发明涉及菌群移植技术领域，尤其涉及一种用于菌群移植的肠道菌群凝胶剂制备方法。

背景技术

人体消化道内生存着约10万亿个微生物，包含1000多种细菌，它们在宿主体内发挥着重要功能，例如阻止病原体入侵，促进消化和营养吸收，合成维生素和激活免疫系统等。另外，肠道和中枢神经通过释放信号分子进行密切的交流互作，因此肠道微生物也具有影响我们大脑发育和行为的潜能。菌群移植作为重建肠道菌群的有效手段，已用于多种菌群相关性疾病的临床治疗和探索性研究，如严重腹泻、CDI、溃疡性结肠炎、肠易激综合征、慢性便秘、炎症性肠炎、功能性便秘等疾病，也可作为一些重大疾病的辅助治疗手段，如肿瘤、糖尿病、自闭症等。菌群移植的方式主要有：口服式菌群胶囊、鼻肠管式以及内镜式(包含胃镜和肠镜)。口服菌群胶囊是一种经上消化道的菌群移植方法；菌群悬液则可以通过多种途径到达十二指肠段以下的小肠，包括经胃镜途径、经鼻空肠管、经内镜肠道植管术，经小肠造口或经皮内窥镜胃空肠造口术等，也可以通过下消化道灌肠、远端回肠造口、结肠造口术、结肠内镜肠道植管术等方式进行移植。

目前，通过菌群悬液进行移植是一种主要的移植方式，然而菌群悬液流动性强，在人体内保留时间较短，菌群无法充分定植，会影响临床的治疗效果。

发明内容

针对上述问题，本发明旨在解决上面描述的问题。本发明的一个目的是提供解决以上问题中的一种用于菌群移植的肠道菌群凝胶剂制备方法，能够制备出黏度较好，并让菌群活性保持较高的肠道菌群凝胶剂，能够满足不同的移植方式需求且在肠道内停留时间长，利于菌群的定植。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

一种用于菌群移植的肠道菌群凝胶剂制备方法，包括以下步骤：

步骤S00菌群制备：收集健康供体新鲜粪便x份，按稀释比例溶解于y份的生理盐水中，再通过粪便分析前处理仪处理去除残渣，得到菌悬液D；

步骤S10凝胶基质制备：将海藻酸钠按照3％的添加量置于开水中使用电动搅拌机1600rpm搅拌30min至完全溶解，再加入营养底物继续搅拌10min至所有试剂完全溶解，后于高压灭菌锅121℃灭菌20min，得到凝胶基质E并冷却待用；

步骤S20凝胶剂制备：将步骤S00中得到的菌悬液D和步骤S10中得到的凝胶基质E按照质量比为5:1的比例混合，通过漩涡震荡仪搅拌均匀得到菌群凝胶剂F；

步骤S30产品获取：将步骤S20中得到的菌群凝胶剂F置于-20℃的冰箱中进行储存。

本发明优选的技术方案在于，还包括步骤S11：将步骤S10中冷却得到的凝胶基质E取样并观察性状，所需观察的性状包括粘度以及流动性。

本发明优选的技术方案在于，在步骤S10中所加入的营养底物包括：5％的葡萄糖、0.02％的维生素C和0.5％的山梨糖醇。

本发明优选的技术方案在于，还包括步骤S21凝胶剂检测：将步骤S20中得到的菌群凝胶剂F取样多份至不同的容器内，进行初始活菌率的测定。

本发明优选的技术方案在于，在步骤S21中，在对初始活菌率进行测定时，先将取样的菌群凝胶剂F稀释若干倍，用LIVE/DEAD^TM BacLight^TM Bacterial Viability Kit染料对样本中的微生物进行染色，使用BD Accuri C6流式细胞仪进行观察并计数，使用BDAccuriTM C6 Plus Software软件分析样本的初始单位菌量和初始单位存活菌量。