[发明专利]一种基于磁助普鲁士蓝纳米酶-DAB底物检测沙丁胺醇的探针平台和方法

权利要求书

1.一种基于磁助普鲁士蓝纳米酶-DAB底物检测沙丁胺醇的探针平台，其特征在于，所述探针平台包括作为探针的偶联有沙丁胺醇抗体的磁助普鲁士蓝纳米酶和作为底物的二氨基联苯胺，所述磁助普鲁士蓝纳米酶为Fe₃O₄内核和普鲁士蓝外壳的核壳复合物。

2.根据权利要求1所述基于磁助普鲁士蓝纳米酶-DAB底物检测沙丁胺醇的探针平台，其特征在于，所述磁助普鲁士蓝纳米酶平均粒径为300～320nm。

3.根据权利要求1所述基于磁助普鲁士蓝纳米酶-DAB底物检测沙丁胺醇的探针平台，其特征在于，所述偶联有沙丁胺醇抗体的磁助普鲁士蓝纳米酶合成方法如下：

(1)合成磁纳米颗粒(Fe₃O₄)：将六水合三氯化铁和柠檬酸三钠溶解在溶剂中并搅拌；加入醋酸钠继续搅拌，得混合液；之后将上述混合液转移到高压反应釜中进行高温反应，反应结束后冷却取出收集棕黑色产物，洗涤数次，干燥即得深棕色粉末；

(2)合成磁助普鲁士蓝纳米酶：取步骤(1)深棕色粉末加入含有相同浓度的铁氰化钾和六水合三氯化铁的溶液中，室温下搅拌反应，溶液颜色从深棕色逐渐变为深绿色，收集深绿色产物，洗涤数次，复溶到超纯水中，即得磁助普鲁士蓝纳米酶溶液；

(3)合成探针：向步骤(2)的磁助普鲁士蓝纳米酶溶液中加入沙丁胺醇抗体，在涡旋震荡下反应；然后加入牛血清蛋白，继续反应后，磁吸收集沉淀物，用硼酸缓冲溶液洗涤数次，最后再复溶到硼酸缓冲溶液，即得探针。

4.根据权利要求3所述基于磁助普鲁士蓝纳米酶-DAB底物检测沙丁胺醇的探针平台，其特征在于，在步骤(1)中，所述六水合三氯化铁与柠檬酸三钠的摩尔比为1:1～5:1。

5.根据权利要求3所述基于磁助普鲁士蓝纳米酶-DAB底物检测沙丁胺醇的探针平台，其特征在于，在步骤(2)中，所述的铁氰化钾和六水合三氯化铁的浓度为1～5mM。

6.根据权利要求3所述基于磁助普鲁士蓝纳米酶-DAB底物检测沙丁胺醇的探针平台，其特征在于，所述室温下搅拌反应的反应时间为1～5h。

7.根据权利要求3所述基于磁助普鲁士蓝纳米酶-DAB底物检测沙丁胺醇的探针平台，其特征在于，所述醋酸钠的摩尔质量为10～20mM。

8.根据权利要求3所述基于磁助普鲁士蓝纳米酶-DAB底物检测沙丁胺醇的探针平台，其特征在于，所述取步骤(1)深棕色粉末加入含有相同浓度的铁氰化钾和六水合三氯化铁的溶液中具体为取8～12mg步骤(1)深棕色粉末加入12～18mL含有相同浓度的铁氰化钾和六水合三氯化铁的溶液中。

9.根据权利要求3所述基于磁助普鲁士蓝纳米酶-DAB底物检测沙丁胺醇的探针平台，其特征在于，所述沙丁胺醇抗体为单克隆抗体、多克隆抗体或纳米抗体。

10.一种基于磁助普鲁士蓝纳米酶-DAB底物检测沙丁胺醇的方法，其特征在于，其包括以下步骤：将待测样品或样品提取液置于离心管中，加入权利要求1所述的偶联有沙丁胺醇抗体的磁助普鲁士蓝纳米酶，室温孵育后磁吸，随后弃去上清液并用磷酸缓冲液复溶后全部转移到微孔中；将试纸条插入微孔反应后弃去样品垫，加入二氨基联苯胺底物进行氧化反应后进行结果判读和读数。