[发明专利]一种基于磁助普鲁士蓝纳米酶-DAB底物检测沙丁胺醇的探针平台和方法

说明书

本发明公开了一种基于磁助普鲁士蓝纳米酶‑DAB底物检测沙丁胺醇的探针平台和方法。所述基于磁助普鲁士蓝纳米酶‑DAB底物检测沙丁胺醇的探针平台包括磁助普鲁士蓝纳米酶和二氨基联苯胺底物，所述磁助普鲁士蓝纳米酶为Fe₃O₄内核和普鲁士蓝外壳的核壳复合物。本发明开发了一种基于磁助普鲁士蓝纳米酶‑DAB底物检测沙丁胺醇的探针平台，一方面，联合二氨基联苯胺底物氧化可将磁助普鲁士蓝纳米酶的信号强度放大2倍以上；另一方面基于磁助普鲁士蓝纳米酶可对样品中的分析物进行富集浓缩，可将分析灵敏度提高10倍以上。

技术领域

本发明涉及了生物检测技术领域，特别是涉及了一种基于磁助普鲁士蓝纳米酶-DAB底物检测沙丁胺醇的探针平台和方法。

背景技术

沙丁胺醇是临床上用于治疗支气管哮喘的药物，然而由于其具有减少脂肪蓄积、增加胴体瘦肉率的作用，经常被非法用作兽药添加使用。研究表明，长期食用含有沙丁胺醇的肉制品容易导致头晕、恶心、心悸和肌肉震颤等不良反应。所以包括中国在内的许多国家都明令禁止将其用于畜牧生产。因此有必要加强对沙丁胺醇的检测和监控。

目前已经开发了多种方法来检测沙丁胺醇，主要包括仪器分析和免疫分析。仪器方法如液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)、电化学传感器和酶联免疫吸附检测(ELISA)等。这些方法具有特异性高、准确度高等优势，但由于仪器昂贵且携带不便，需要专业人员操作、费时费力，限制了其在现场快速筛选中的应用。相比之下，免疫层析分析法因其成本低、需时短、无需专业人员进行操作等优点而被广泛应用在现场大批量检测中。然而传统的胶体金免疫层析方法由于灵敏度低、假阳性假阴性率高、受背景信号干扰大的缺点，特别是针对猪尿这种样品基质影响大的样本，对于痕量分析物的检测是极大的挑战。因此，提高免疫层析方法的检测灵敏度、提高结果准确性、降低基质干扰对于拓延其适用范围具有非常重要的意义。

对于小分子物质的检测，一般采用竞争型策略。灵敏度主要由信号强度和反应体系中分析物和包被抗原的竞争强度这两个因素决定，减少抗体/探针的使用量可以促成激烈的竞争，导致分析物浓度与信号强度之间的剂量响应关系更加灵敏。但另一方面，抗体的减少会导致信号强度的减弱，不仅会导致结果判断困难，甚至会出现假阳性现象。因此，如何在减少抗体用量的同时保持相同的信号强度是提高灵敏度的一个关键拟解决问题。

发明内容

为了弥补已有技术的缺陷，解决传统的胶体金免疫层析检测沙丁胺醇方法的灵敏度低、假阳性假阴性率高、受背景信号干扰大等问题，本发明提供了一种基于磁助普鲁士蓝纳米酶 -DAB底物检测沙丁胺醇的探针平台和方法。

本发明所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现：

一种基于磁助普鲁士蓝纳米酶-DAB底物检测沙丁胺醇的探针平台，所述探针平台包括作为探针的偶联有沙丁胺醇抗体的磁助普鲁士蓝纳米酶和作为底物的二氨基联苯胺(DAB)，所述磁助普鲁士蓝纳米酶为Fe₃O₄内核和普鲁士蓝外壳的核壳复合物。

进一步地，所述磁助普鲁士蓝纳米酶平均粒径为300～320nm。

进一步地，所述偶联有沙丁胺醇抗体的磁助普鲁士蓝纳米酶合成方法如下：

(1)合成磁纳米颗粒(Fe₃O₄)：将六水合三氯化铁和柠檬酸三钠溶解在溶剂中并搅拌；加入醋酸钠继续搅拌，得混合液；之后将上述混合液转移到高压反应釜中进行高温反应，反应结束后冷却取出收集棕黑色产物，洗涤数次，干燥即得深棕色粉末；

(2)合成磁助普鲁士蓝纳米酶(Fe₃O₄@PB)：取步骤(1)深棕色粉末加入含有相同浓度的铁氰化钾和六水合三氯化铁的溶液中，室温下搅拌反应，溶液颜色从深棕色逐渐变为深绿色，收集深绿色产物，洗涤数次，复溶到超纯水中，即得磁助普鲁士蓝纳米酶溶液；