[发明专利]基于双功能融合蛋白的真菌毒素磁化学发光免疫分析试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种基于双功能融合蛋白的真菌毒素磁化学发光免疫分析试剂盒及其应用。该试剂盒包括链霉亲和素磁微粒、生物素标记的真菌毒素抗原、真菌毒素标准品溶液、真菌毒素纳米抗体‑碱性磷酸酶双功能融合蛋白、样本稀释液、洗涤液、底物液。本发明试剂盒将化学发光、磁微粒分离和基因工程技术汇聚在一起，可实现真菌毒素的快速、准确、全自动化检测，食用油可直接加样检测，无需提取、离心等操作，减少检测人员的操作误差，降低对检测人员的能力要求，显著提高基层大批量样品的检测效率，为真菌毒素检测、监测提供有力的手段。

技术领域

本发明属于食品安全检测技术领域，涉及一种基于双功能融合蛋白的真菌毒素磁化学发光免疫分析试剂盒及其应用。

背景技术

真菌毒素(Mycotoxins)是产毒真菌在一定环境条件下产生的次级代谢产物，广泛污染农产品、食品、中药材及饲料等植物源性产品。在农产品、食品和饲料中比较常见的真菌毒素有：脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol，又称呕吐毒素，DON)、黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1，AFB1)、黄曲霉毒素B2(AFB2)、黄曲霉毒素G1(AFG1)、黄曲霉毒素G2(AFG2)、赭曲霉毒素A(ochratoxin A，OTA)、伏马毒素B1(fumonisin B1，FB1)、伏马毒素B2(FB1)、玉米赤霉烯酮(zearalenone，ZEN)、T-2毒素(T-2toxin)、HT-2毒素(HT-2toxin)或黄曲霉毒素M1(aflatoxin M1，AFM1)、展青霉素(patμLin)等。真菌毒素可以引起人类和动物的急性或慢性中毒，可损害机体的肝脏、肾脏、神经组织、造血组织及皮肤组织等，对人类和动物健康可产生严重的影响。鉴于真菌毒素的危害，世界各国对其含量进行了严格的限定。开展真菌毒素残留污染研究，开发高灵敏、低成本、可靠的自动化检测技术对保证农产品、食品、中药和饲料等的质量和安全，打破国外的技术壁垒，保护我国在国际贸易中的经济利益，增加出口创汇具有重要意义。

目前真菌毒素的检测方法有薄层色谱法，高效液相色谱法、酶联免疫吸附法，毛细管电泳法、液质联用法等。其中薄层色谱法是最早使用的检测真菌毒素的方法，其优点是适合于没有经过专门培训的人员操作，且成本低、无需价格昂贵的仪器。但是，薄层色谱法的样品处理繁琐，实验过程复杂，所需检测周期较长，容易受到杂质的干扰。测定时用目测半定量，存在主观影响较大，灵敏度不高等缺点，已远远不能满足现代检测要求。酶联免疫吸附法具有检测特异性好、灵敏度高、并且检测成本较低的优点，适用于基层机构大量样品的筛选和普查，可以大大节省时间和费用。酶联免疫吸附法的主要问题是容易造成假阳性。因此，主要用于基层的筛查检测。高效液相色谱法、毛细管电泳法和液质联用法等仪器分析方法具有准确度高、灵敏性强、可微量测定等优点，是目前常用的食品中毒素检测的方法。但因其对样品纯度要求较高，需要经过一些前处理过程，导致检测成本高、周期长，无法满足大批量样品快速筛选的要求。磁微粒具有超顺磁微粒性，在磁微粒场下具有磁微粒场响应性，将磁微粒应作免疫检测的固相载体，将大大提高反应的表面积，更容易进行固相、液相分离，可提高检测的灵敏度。采用微小的磁微粒作为固相可增加包被表面积，从而增加抗原或抗体的吸附量，既加快了反应速度，也使清洗和分离更简便。目前免疫酶标试剂制备方式是采用化学标记方法，如使用双功能试剂，戊二醛，过碘酸盐，SMCC试剂{4(N马来酰亚胺基甲基)环己烷1羧酸琥珀酰亚胺酯等)}，2IT试剂(亚氨基噻吩盐酸盐)等，将抗体与酶偶联，但是化学偶联方法操作复杂，偶联效率低，由于偶联位点不固定且条件剧烈，易导致抗体或酶活性降低，抗体与酶的结合物不均一，需要分离去除未结合的酶和抗体，且去除未结合的抗体至关重要，因为游离的抗体会与酶标记抗体竞争相应的抗原，减低结合到固相上的酶标抗体量，因而降低了检测的灵敏度。

由于真菌毒素危害较大，因而寻找一种简单、快速、准确、自动化的检测方法，对于研究真菌毒素的检测和污染控制具有重要意义。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种真菌毒素磁化学发光免疫分析试剂盒，该试剂盒将化学发光、磁微粒分离和基因工程技术汇聚在一起，具有良好的准确性、灵敏度和重复性。