[发明专利]一种夏栎组织培养提高再生效率的处理方法

权利要求书

1.一种夏栎组织培养提高再生效率的处理方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、首先对夏栎种子预处理，获得带子叶的合子胚作为培养体；

S2、将培养体依次经过流水冲洗、酒精漂洗、无菌水第一次冲洗、升汞浸泡以及无菌水第二次冲洗后，通过无菌吸水纸将培养体上的水分吸干，最后将培养体接种至无菌苗培养基中进行培养诱导无菌苗；

S3、将无菌苗培养基中培养诱导出的无菌苗新芽分割成单株无菌苗，并将单株无菌苗分别接种至增殖培养基中进行增殖培养；

S4、当无菌苗培育至3-4cm高时，将无菌苗接种到生根培养基中进行生根培养；

S5、通过步骤S3获得无菌苗幼嫩茎段外植体，同时把切掉幼嫩茎段以后的带子叶胚去掉子叶，将去掉子叶的子叶胚接种到愈伤组织诱导培养基进行愈伤组织诱导；

S6、通过步骤S5获得紧密的愈伤组织，将紧密的愈伤组织接种至体胚诱导培养基进行体胚诱导。

2.如权利要求1所述的夏栎组织培养提高再生效率的处理方法，其特征在于，所述步骤S2、S3以及S4中具体培养条件为：培养温度(25±1)℃，光照时间16h/d，光照强度1500-2000Lx。

3.如权利要求1所述的夏栎组织培养提高再生效率的处理方法，其特征在于，所述步骤S5和步骤S6均采用暗培养。

4.如权利要求1所述的夏栎组织培养提高再生效率的处理方法，其特征在于，所述步骤S1中夏栎种子选自生长健壮、干形通直、树冠端正、无病虫害、处于壮龄，且耐水淹的优良单株的夏栎植株。

5.如权利要求1或4所述的夏栎组织培养提高再生效率的处理方法，其特征在于，所述步骤S1中夏栎种子预处理时，首先将外壳去掉，利用手术刀在种子胚上方6-9mm位置处横切掉，获得带有一部分子叶的合子胚。

6.如权利要求1所述的夏栎组织培养提高再生效率的处理方法，其特征在于，所述步骤S2中具体处理方法包括将培养体放置到流水下冲洗两个小时，随后在超净工作台上用75％酒精漂洗30s，然后利用无菌水进行一次冲洗，随后将培养体浸泡在0.1％升汞10min，最后用无菌水进行二次冲洗。

7.如权利要求1所述的夏栎组织培养提高再生效率的处理方法，其特征在于，所述步骤S2中无菌苗培养基的配方为：MS+0.6mg/L 6-BA+1.0mg/L 2,4-D，PH 5.8；所述步骤S3中增殖培养基的配方为：WPM+0.4mg/L 6-BA，pH 5.8；所述步骤S4中生根培养基的配方为：WPM+0.25mg/L IBA+0.10mg/L NAA，pH 5.8；所述步骤S5中愈伤组织诱导培养基的配方为：MS+0.5mg/L 6-BA+0.4mg/L NAA，PH 5.8；所述步骤S6中体胚诱导培养基的配方为：MS+0.5mg/L6-BA+0.2mg/L NAA，PH 5.8。

8.如权利要求1或6或7所述的夏栎组织培养提高再生效率的处理方法，其特征在于，所述步骤S2中培养体接种方法包括将吸干水分的夏栎种子接种至含无菌苗培养基的培养瓶中进行培养，每个培养瓶中接种2粒夏栎种子，共接种30瓶，培养3周后观察，并统计夏栎种子发芽率及其污染率。

9.如权利要求1所述的夏栎组织培养提高再生效率的处理方法，其特征在于，所述步骤S2中，将培养20-30天的无菌苗的幼嫩茎段作为外植体，并切成1-2cm，随后将切割后的分段外植体接种于所述步骤S3增殖培养基中培养瓶中进行增殖培养。