[发明专利]一种夏栎组织培养提高再生效率的处理方法

说明书

本发明提出了一种夏栎组织培养提高再生效率的处理方法，包括以下步骤：首先对夏栎种子进行预处理，随后进行诱导无菌苗，随后将诱导出的无菌苗新芽分割成单株无菌苗，并分别接种在增殖培养基中增殖培养，随后进行生根培养；将去掉子叶的子叶胚接种到愈伤组织诱导培养基进行愈伤组织诱导获得紧密的愈伤组织，把紧密的愈伤组织进行体胚诱导。通过对夏栎种子进行消毒处理培育获得无菌苗，可有效避免直接对夏栎幼苗直接消毒对后续试验中所需材料幼嫩茎段造成的损伤，提高试验成功率；同时在带子叶的合子胚培养出无菌苗，并切掉无菌苗转入诱导培养后，把自身的子叶切掉继续培养，并全程暗培养，进一步提高夏栎组织培养的再生效率。

技术领域

本发明涉及植物培养技术领域，特别是涉及一种夏栎组织培养提高再生效率的处理方法。

背景技术

夏栎(Quercus robur L.)亦称“夏橡”、“英国栎”，是壳斗科(Fagaceae)栎属(Quercus L.)大型落叶乔木，具有耐盐碱、适应性广泛的特点。在土层较厚、供水条件良好情况下，夏栎长势旺盛、根系健壮，寿命可长达100年。且夏栎是珍贵的园林绿化树种，不仅病虫害少，果还可入药或作饲料，具有极大的育种价值。由于1～3年生的夏栎幼苗主根生长快，侧根发育较慢，导致移栽苗木成活低，缓苗时间长，生根困难。

离体培养技术，能够从离体的组织、器官和细胞中培养出大量再生植株。此方法具有不受季节限制、能够保持品种优良特性、短时高效等优点。目前既已报道出世界上有130个科，超过1 500个种的植物种类能够利用此技术得到再生植株，其中包含木本植物400余种，且随着科学技术的发展仍在不断增多。通过离体培养技术获得再生植株的研究在中国20世纪70年代初就已开始，并早已在国际上处于领先水平，该技术已经成为大量繁殖和保存植物种质资源的有效途径。然而，在国内，由于夏栎在生长量和生长速度方面不如大多数其他栎类树种，导致其繁殖速度慢，数量较少，并且引进困难，因此在相关方面报道较少。

发明内容

针对目前夏栎繁殖速度慢，数量较少，并且引进困难的技术问题，本申请提出了一种夏栎组织培养提高再生效率的处理方法。

本发明通过以下技术方案来实现上述目的：

本申请公开了一种夏栎组织培养提高再生效率的处理方法，包括以下步骤：

S1、首先对夏栎种子预处理，获得带子叶的合子胚作为培养体；

S2、将培养体依次经过流水冲洗、酒精漂洗、无菌水第一次冲洗、升汞浸泡以及无菌水第二次冲洗后，通过无菌吸水纸将培养体上的水分吸干，最后将培养体接种至无菌苗培养基中进行培养诱导无菌苗；

S3、将无菌苗培养基中培养诱导出的无菌苗新芽分割成单株无菌苗，并将单株无菌苗分别接种至增殖培养基中进行增殖培养；

S4、当无菌苗培育至3-4cm高时，将无菌苗接种到生根培养基中进行生根培养；

S5、通过步骤S3获得无菌苗幼嫩茎段外植体，同时把切掉幼嫩茎段以后的带子叶胚去掉子叶，将去掉子叶的子叶胚接种到愈伤组织诱导培养基进行愈伤组织诱导；

S6、通过步骤S5获得紧密的愈伤组织，将紧密的愈伤组织接种至体胚诱导培养基进行体胚诱导。

本申请通过对夏栎种子进行消毒处理培育获得无菌苗，可有效避免直接对夏栎幼苗直接消毒对后续试验中所需材料幼嫩茎段造成的损伤，提高试验成功率；同时在带子叶的合子胚培养出无菌苗，并切掉无菌苗转入诱导培养后，把自身的子叶切掉继续培养，并全程暗培养，可诱导出愈伤组织并进一步进行体细胞胚发生，进一步提高夏栎组织培养的再生效率。

优选地，所述步骤S2、S3以及S4中具体培养条件为：培养温度(25±1)℃，光照时间16h/d，光照强度1500-2000Lx。

优选地，所述步骤S5和步骤S6均采用暗培养。