[发明专利]一种构建原位肝癌动物模型的方法有效
| 申请号： | 202210163036.6 | 申请日： | 2022-02-22 |
| 公开（公告）号： | CN114540353B | 公开（公告）日： | 2023-04-07 |
| 发明（设计）人： | 周素芳 | 申请（专利权）人： | 广西医科大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N9/22;C12N15/12;C12N15/85;C12N5/10;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京东方盛凡知识产权代理有限公司 11562 | 代理人： | 程小芳 |
| 地址： | 530021 广*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 构建 原位 肝癌 动物 模型 方法 | ||
1.一种利用CRISPR/Cas9系统构建原位肝癌动物模型的方法，其特征在于，包括如下步骤：以AXIN1基因、PTEN基因和TP53基因为靶基因设计sgRNA，并将所述sgRNA克隆到CRISPR/Cas9质粒系统中，通过转染动物肝癌细胞，筛选对靶基因产生编辑能力较强的sgRNA；然后，通过串联基因编辑技术，将所述sgRNA采用注射法靶向动物肝脏，即能获取原位肝癌动物模型；所述基因的组合方式为：AXIN1基因和PTEN基因组合，或PTEN基因、TP53基因和AXIN1基因组合；所述动物为小鼠；
所述sgRNA为如SEQ ID NO：1-3所示的特异性靶向AXIN1基因的sgRNA，如SEQ ID NO：4-6所示的特异性靶向PTEN基因的sgRNA以及如SEQ ID NO：7-9所示的特异性靶向TP53基因的sgRNA。
2.一种同时靶向敲除AXIN1基因和PTEN基因的CRISPR/Cas9系统，其特征在于，包括权利要求1中所述的特异性靶向AXIN1基因的sgRNA和特异性靶向PTEN基因的sgRNA。
3.一种同时靶向敲除PTEN基因、TP53基因和AXIN1基因的CRISPR/Cas9系统，其特征在于，包括权利要求1中所述的特异性靶向PTEN基因的sgRNA、特异性靶向TP53基因的sgRNA和特异性靶向AXIN1基因的sgRNA。
4.如权利要求1中所述的sgRNA或权利要求2-3任一项所述的CRISPR/Cas9系统在构建原位肝癌动物模型中的应用，其特征在于，所述动物为小鼠。
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