[发明专利]一种生产2-KLG的葡萄糖酸杆菌一步菌底盘细胞库的构建方法

权利要求书

1.一种具有2-KLG生产能力的葡萄糖酸杆菌底盘细胞，其特征在于，以葡萄糖酸杆菌为出发菌株，过表达了内源的山梨酮脱氢酶和山梨糖脱氢酶；所述山梨酮脱氢酶的和山梨糖脱氢酶为(a)或(b)：

(a)来源于Gluconobacter oxydans WSH-004、Gluconobacter cerinus CGMCC 1.110、Gluconobacter japonicus CGMCC 1.49、或Gluconobacter oxydans WSH-003的山梨酮脱氢酶的和山梨糖脱氢酶；

(b)与(a)的山梨酮脱氢酶基因具有≥80.72％序列一致性的葡萄糖酸杆菌来源的SNDH基因，及与(a)的山梨糖脱氢酶基因具有≥77.88％序列一致性的葡萄糖酸杆菌来源的SDH基因。

2.根据权利要求1所述的葡萄糖酸杆菌底盘细胞，其特征在于，过表达了内源SNDHSDH基因簇。

3.根据权利要求2所述的葡萄糖酸杆菌底盘细胞，其特征在于，所述SNDHSDH基因簇的核苷酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.10所示。

4.根据权利要求1～3任一所述的葡萄糖酸杆菌底盘细胞，其特征在于，所述出发菌株包括但不限于G.oxydans WSH-003、G.oxydans WSH-004，G.cerinus CGMCC 1.110、G.japonicus CGMCC 1.49、G.oxydans LMG 1764、G.oxydans LMG 1399、G.oxydans LMG1386、G.oxydans DSM 3504、G.oxydans LMG 27012、G.oxydans NL71、G.oxydans 1.637或G.oxydans H24。

5.根据权利要求2～4任一所述的葡萄糖酸杆菌底盘细胞，其特征在于，所述过表达是将含有SNDHSDH基因的质粒转入葡萄糖酸杆菌细胞中。

6.根据权利要求5所述的葡萄糖酸杆菌底盘细胞，其特征在于，所述过表达是使山梨糖脱氢酶的表达量≥7.4×10⁹，并使山梨酮脱氢酶的表达量≥4.6×10¹⁰。

7.根据权利要求5所述的葡萄糖酸杆菌底盘细胞，其特征在于，所述质粒包括但不限于商业化质粒pBBRMCS5；所述SNDHSDH基因簇受启动子P₁₁₄启动表达。

8.一种生产2-KLG的方法，其特征在于，应用权利要求1～7任一所述的葡萄糖酸杆菌底盘细胞或在所述底盘细胞的基础上进行改进的重组葡萄糖酸杆菌为发酵菌株，以含山梨醇的培养基进行发酵生产。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述发酵是在28～32℃、200～230rpm发酵96～100h。

10.权利要求1～7任一所述的葡萄糖酸杆菌底盘细胞或权利要求8～9任一所述方法在生产2-KLG或生产2-KLG上、下游产物中的应用。