[发明专利]一种外生菌根真菌与兴安落叶松修复重金属污染土壤的方法

权利要求书

1.一种外生菌根真菌与兴安落叶松修复重金属污染土壤的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)制备外生菌根真菌菌剂；

(2)培育兴安落叶松幼苗；

(3)菌剂施用，改良土壤。

2.根据权利要求1所述的外生菌根真菌与兴安落叶松修复重金属污染土壤的方法，其特征在于，所述步骤(1)中制备外生菌根真菌菌剂的方法为：外生菌根真菌选用美味牛肝菌和血红铆钉菇，采用固体培养基进行平板培养，24-26℃培养7-8d，菌丝长满后用打孔器取边缘菌块的直径为7-8mm，置于液体培养基培养，放入摇床内避光培养18-20d，得到外生菌根真菌菌剂。

3.根据权利要求2所述的外生菌根真菌与兴安落叶松修复重金属污染土壤的方法，其特征在于，所述摇床的温度23-25℃，转速100-120r/min。

4.根据权利要求2所述的外生菌根真菌与兴安落叶松修复重金属污染土壤的方法，其特征在于，所述液体培养基的配方为马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，KH₂PO₄ 3g/L，MgSO₄·7H₂O1.5g/L，VitaminB1 0.02g/L。

5.根据权利要求2所述的外生菌根真菌与兴安落叶松修复重金属污染土壤的方法，其特征在于，所述固体培养基的配方为马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂15g/L，去离子水1L。

6.根据权利要求1所述的外生菌根真菌与兴安落叶松修复重金属污染土壤的方法，其特征在于，所述步骤(3)中菌剂施用的具体操作为：选取长势相近的幼苗，用蒸馏水将根部清洗，将外生菌根真菌Be和Gr的菌液浸染根部48-50h后移栽到容器中，每个容器内放置一株幼苗，萌发30-32d后，幼苗长出侧根后，选生长一致的苗，放于装满蒸馏水的容器内让根部土壤自由散落，用蒸馏水清洗；将液体培养后的真菌溶液磨碎后制成菌液，将筛选出的幼苗放于菌液内进行浸染，浸泡42h后取出，移栽到容器里，每个容器内放置一株幼苗；栽植后置于温度23-25℃、16-18h光照培养室内进行培养。

7.根据权利要求6所述的外生菌根真菌与兴安落叶松修复重金属污染土壤的方法，其特征在于，所述步骤(3)中将菌根化兴安落叶松幼苗移栽入装有重金属土壤中，对重金属污染的土壤进行改良。

8.根据权利要求1所述的外生菌根真菌与兴安落叶松修复重金属污染土壤的方法，其特征在于，所述步骤(2)中培育兴安落叶松幼苗的具体方式为将兴安落叶松种子均匀放入带有双层湿润滤纸的培养皿中，遮光放入4-5℃冰箱中8-12d，次氯酸钠消毒后，用蒸馏水冲洗；

将种子播入灭菌处理过的基质，将其放入光照培养室中，设置人工气候培养条件：光照下22-25℃培养14-16h，黑暗下16-18℃培养6-8h，每日定期喷洒蒸馏水，种子萌发28-30d后进行接种。

9.根据权利要求8所述的外生菌根真菌与兴安落叶松修复重金属污染土壤的方法，其特征在于，所述基质为沙子、草炭土、蛭石的体积比为2:2:1混合均匀，将基质放于灭菌袋进行高温高压灭菌多次。

10.根据权利要求9所述的外生菌根真菌与兴安落叶松修复重金属污染土壤的方法，其特征在于，所述步骤(2)中次氯酸钠的质量浓度为2％，消毒时间为10-12min。