[发明专利]一种Ⅱ型胶原蛋白肽多糖去除的方法

说明书

一种Ⅱ型胶原蛋白肽多糖去除的方法，包括步骤：（1）原料预处理；（2）制备酶解液；（3）多糖降解；（4）超滤脱糖。本发明通过结合超声降解技术与超滤膜分离技术的方式制备多糖含量低的Ⅱ型胶原蛋白肽，具有脱糖效果好、脱糖效率高、蛋白肽损失率低、无有机溶剂残留、绿色环保的优点。

技术领域

本发明属于生物提取技术领域，具体涉及一种Ⅱ型胶原蛋白肽多糖去除的方法。

背景技术

中国拥有世界上最多的家畜，如猪、牛、羊、鸡和鸭。随着肉类总产量的增加，牲畜屠宰废弃物也会增加。我国每年生产各类家畜骨近1000万吨，这无疑是一个巨大的资源。但是，在目前的消费市场上，除了排骨和体腔骨可以直接用于饮食，需求量大，其他绝大多数骨骼没有得到充分利用。而动物骨头中富含蛋白质、氨基酸、软骨素、维生素等多种矿物质，钙、磷、铁等含量较高。动物骨头，尤其是动物软骨中富含营养物质，因此，近年来从动物软骨中提取II型胶原蛋白肽成为研究热点。

但是，在处理软骨的工艺中，经过初次酶解后的酶解液含有大量的硫酸软骨素等多糖，目前常见的分离多糖的方式主要有分级沉淀法、色谱分离法。分级沉淀法主要是利用多糖在乙醇中溶解度小，随着乙醇的体积分数逐渐增大，不同聚合度的多糖分子分别沉淀析出。但是，分级沉淀法中，会有部分的多肽分子随着醇的体积分数增加析出。色谱分离法主要有凝胶柱色谱法和离子交换色谱法。凝胶柱色谱法主要是利用大小不同的分子在多孔固定相中的选择渗透而达到分离；离子交换色谱法根据组分离子对树脂亲合力不同而得到分离。这些传统方法操作较为繁琐，且操作成本高。

相较于分级沉淀、色谱分离两种方法而言，膜分离法处理条件更为温和、安全，无其他试剂混入更加干净无污染，而且利用超滤膜不会破坏营养成分，不用进行额外处理将酶解液中的多糖分离出来。申请公布号为CN111808185A的文件公开了一种从牛软骨中提取弹性蛋白肽的方法，采用先高温提取，后分别采用渗透膜、纳滤膜分离的工艺得到蛋白肽。该方法采用两种膜分离技术，不仅成本偏高，而且分离效率也较慢。

发明内容

针对上述存在的问题，本发明的目的是提供一种Ⅱ型胶原蛋白肽多糖去除的方法，通过结合超声降解技术与超滤膜分离技术的方式制备多糖含量低的Ⅱ型胶原蛋白肽，具有脱糖效果好、脱糖效率高、蛋白肽损失率低、无有机溶剂残留、绿色环保的优点。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种Ⅱ型胶原蛋白肽多糖去除的方法，包括步骤：

（1）原料预处理：选取提取完硫酸软骨素的动物软骨，粉碎，然后进行脱脂、脱杂蛋白、脱钙处理；

（2）制备酶解液：将步骤（1）向预处理得到的动物软骨中加入蛋白酶酶解2-6h后经灭酶、离心，得到酶解液；

（3）多糖降解：向步骤（2）得到的酶解液中加入辅助降解剂并进行超声波处理，得到降解液；

（4）超滤脱糖：选取5-10kDa分子量的超滤膜对步骤（3）得到的降解液进行过滤，收集滤出液，得到Ⅱ型胶原蛋白肽溶液。

作为本发明的进一步优选，步骤（3）中所述辅助降解剂与所述酶解液的体积比为1-2.5:25；所述辅助降解剂为过氧化氢、乙醇中的一种或两者的复配物。

作为本发明的进一步优选，步骤（3）中超声波处理条件为：超声波频率20-80kHz、温度30-60℃、时间0.5-3h。

作为本发明的进一步优选，步骤（4）中所述滤出液的流速为2-4ml/min。

作为本发明的进一步优选，步骤（2）中所述蛋白酶与动物软骨的质量比为0.01-0.1：1。

作为本发明的进一步优选，步骤（2）中所述蛋白酶包括碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶。

作为本发明的进一步优选，步骤（1）中脱脂处理包括：采用乙醚溶液浸泡12-24h，然后加热直至乙醚完全挥发。