[发明专利]一种提高人表皮生长因子分泌生产效率的方法有效

专利信息
申请号: 202210176910.X 申请日: 2022-02-25
公开(公告)号: CN114525235B 公开(公告)日: 2023-07-14
发明(设计)人: 应汉杰;李梦婷;柳东;张冲;周淼;王振宇;庄伟;王志;刘金乐 申请(专利权)人: 郑州大学;南京工业大学
主分类号: C12N1/21 分类号: C12N1/21;C12N15/31;C12N15/54;C12N15/52;C12N15/70;C12N11/02;C12N11/096;C12N11/14;C12N11/082;C12N11/084;C12N11/093;C12P21/02;C12R1/19
代理公司: 江苏圣典律师事务所 32237 代理人: 仲凌霞;肖明芳
地址: 450000 河南省郑*** 国省代码: 河南;41
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摘要:
搜索关键词: 一种 提高 表皮 生长因子 分泌 生产 效率 方法
【权利要求书】:

1.一种重组大肠杆菌,其特征在于,对大肠杆菌采用以下方式进行改造;

敲除ychJ基因的表达;所述ychJ基因的核苷酸序列是分别是NCBI上的Gene ID:945828所示的核苷酸序列;所述大肠杆菌导入了产人表皮生长因子的质粒pET30a hEGF;所述人表皮生长因子的基因为SEQ ID NO.1。

2.一种提高人表皮生长因子分泌生产效率的方法,其特征在于,将权利要求1所述重组大肠杆菌于培养基中进行发酵,即得含人表皮生长因子的发酵液;所述发酵过程中加入0.5~1.5 mM异丙基-β-D-硫代半乳糖苷。

3.根据权利要求2所述方法,其特征在于,所述培养基含有胰蛋白胨5~15 g/L,酵母粉提取物1~30 g/L,氯化钠0~12 g/L,葡萄糖0~50 g/L,甘油0~10 mL/L,磷酸氢二钾0~14.4g/L,磷酸二氢钾0~5 g/L。

4.根据权利要求3所述方法,其特征在于,当氯化钠含量不为0 g/L时,甘油、磷酸氢二钾和磷酸二氢钾的含量均为0 g/L。

5.根据权利要求3所述方法,其特征在于,当氯化钠含量为0 g/L时,葡萄糖的含量为0g/L,甘油、磷酸氢二钾和磷酸二氢钾的含量均不为0 g/L。

6.根据权利要求2所述方法,其特征在于,所述发酵的温度为25~37℃。

7.根据权利要求2所述方法,其特征在于,所述发酵为固定化发酵。

8.根据权利要求7所述方法,其特征在于,所述固定化发酵的载体为棉纤维、聚酯纤维、无纺布、聚乳酸、尼龙纤维、活性炭、聚乙烯、聚乙烯醇、丝绸、聚氨酯和粘土中的任意一种或多种组合。

9.根据权利要求7所述方法,其特征在于,所述固定化发酵的载体为木浆棉。

10.根据权利要求7所述方法,其特征在于,所述固定化发酵中载体的用量为5~100 g/L。

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