[发明专利]一种枯草芽孢杆菌前蛋白酶9靶向结合蛋白的筛选方法与应用在审
| 申请号： | 202210179591.8 | 申请日： | 2022-02-25 |
| 公开（公告）号： | CN114438075A | 公开（公告）日： | 2022-05-06 |
| 发明（设计）人： | 刘博巽 | 申请（专利权）人： | 刘博巽 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12N15/70;C07K14/00;A61K38/16;A61P9/10;A61P3/06;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京钟山专利代理有限公司 32252 | 代理人： | 李小静 |
| 地址： | 210000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 枯草 芽孢 杆菌 蛋白酶 靶向 结合 蛋白 筛选 方法 应用 | ||
1.一种枯草芽孢杆菌前蛋白酶9靶向结合蛋白的筛选方法，其特征在于：所述的枯草芽孢杆菌前蛋白酶9为PCSK9；
所述的筛选方法为：通过噬菌体展示技术、基因测序、质粒稳转大规模表达技术，自噬菌体展示文库中筛选出一种可与PCSK9特异性结合的靶向结合蛋白。
2.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌前蛋白酶9靶向结合蛋白的筛选方法，其特征在于：所述的噬菌体展示肽筛选技术，其特征在于：将噬菌体展示文库在包被PCSK9蛋白的培养皿孵育后，使用含0.5％吐温的磷酸盐缓冲液冲洗，所述的含0.5％吐温的磷酸盐缓冲液即为0.5％PBST；使用0.5％PBST将非结合性克隆洗脱，保留的结合性克隆经侵染大肠杆菌后以充分扩增、使用VCSM13辅助噬菌体营救发酵后沉淀以提取、聚乙二醇沉降后反复冲洗以纯化，获得筛选后收集的结合性噬菌体。
3.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌前蛋白酶9靶向结合蛋白的筛选方法，其特征在于：所述的基因测序、质粒稳转表达技术为：将筛选后收集的结合性噬菌体行DNA测序，并将测序所得的核苷酸序列转换为蛋白氨基酸序列并比对，将合适序列制备为质粒，借助大肠杆菌体系表达合成。
4.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌前蛋白酶9靶向结合蛋白的筛选方法，其特征在于：所述的PCSK9靶向结合蛋白，本蛋白是一种线性结构的蛋白质，由153个氨基酸残基组成，不含二硫键；可特异性的结合由细胞合成、分泌的PCSK9蛋白。
5.根据权利要求1至4任一项所述的枯草芽孢杆菌前蛋白酶9靶向结合蛋白其应用，其特征在于：所述的PCSK9靶向结合蛋白在治疗高胆固醇血症与动脉粥样硬化性心血管病中的应用。
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