[发明专利]一种狂犬病病毒修饰性mRNA疫苗及其制备方法

说明书

本发明涉及生物医药技术领域，具体地说是一种狂犬病病毒修饰性mRNA疫苗及其制备方法。一种狂犬病病毒修饰性mRNA疫苗，其特征在于：所述的疫苗包括：用于表达狂犬病病毒优化的免疫原mRNA，所述的免疫原为G蛋白、G^△TM蛋白、G^trimer蛋白、M蛋白、G^trimer蛋白和M蛋白的抗原组合；疫苗载体，所述的疫苗载体为可被mRNA利用的脂质体纳米颗粒。本发明的主要优点在于：（1）首次选择狂犬病病毒的G蛋白胞外域、G蛋白三聚体结构作为抗原研发由脂质体纳米颗粒包裹的修饰性mRNA疫苗；（2）首次研发基于表达M蛋白和G蛋白的mRNA疫苗联合免疫的狂犬病病毒疫苗；（3）研发的四种狂犬病病毒mRNA疫苗均有效诱导高效的中和抗体反应。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体地说是一种狂犬病病毒修饰性mRNA疫苗及其制备方法。

背景技术

狂犬病是一种由狂犬病病毒(rabies virus,RABV)传播的人畜共患病，人患狂犬病主要由被患病的狗咬伤或抓伤所致，发病后死亡率高达100％，是病死率最高的传染病之一。全球每年有5.9-6.1万人死于狂犬病，涉及到150多个国家，每年全球因为狂犬病造成的直接和间接经济损失高达近86亿美元(约合544亿人民币)，给人类公共卫生带来了很大的负担。

狂犬病毒一般通过携带狂犬病毒的动物(犬类为主)进行传播，病毒从动物的唾液通过咬伤的伤口感染宿主。该病毒具有高度嗜神经性，可直接进入中枢神经，潜伏期5天到1年之间。在出现临床症状之前无可靠有效的手段检测是否被感染狂犬病毒。感染者早期会感到伤口发热和刺痛，随着病程的进展，患者会出现异常躁动、意识障碍和痉挛等行为，数天后死亡。

目前尚无特异性药物治疗狂犬病，只能借助于疫苗进行预防和控制。狂犬疫苗研究历史悠久。现有的狂犬疫苗研发平台有多种，灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位蛋白疫苗、DNA疫苗、病毒的载体类疫苗以及病毒样颗粒疫苗。人用狂犬神经组织疫苗是利用感染狂犬病兔子的脊髓制备而成，因为无法保证灭活的一致性和致敏性等问题，这种神经源性疫苗在使用了近一个世纪后被替代。狂犬鸡胚疫苗培养条件苛刻，容易发生病毒污染影响大规模生产。利用细胞培养狂犬疫苗，如人二倍体细胞和Vero细胞等，尽管比较安全和有效，但是灭活疫苗多次接种、生产周期较长以及费用高等因素限制了该类疫苗的使用，因此需要更加经济、安全、高效的狂犬疫苗来替代当前使用的疫苗。

狂犬病病毒(Rabies virus,RV)是属于弹状病毒科(Rhabdoviridae)狂犬病病毒属(Lyssavirus)的一类包膜病毒，包含一条12kb长的单股负链RNA基因组，编码5个结构蛋白：核蛋白(nucleoprotein，N)、磷蛋白(phosphoprotein，P)、基质蛋白(matrix protein，M)、表面糖蛋白(glycoprotein，G)和RNA多聚酶(RNA polymerase，L)。狂犬病病毒颗粒类似子弹形状，表面分布着G蛋白的三聚体结构，N、P和L蛋白结合在基因组RNA上，参与RNA的复制和翻译。G蛋白是一个65KDa的糖蛋白，是病毒表面蛋白的主要成员，具有诱导细胞免疫和体液免疫的抗原决定簇，是诱导中和抗体的最主要分子靶点。针对G蛋白的单克隆抗体和疫苗能够为宿主提供有效保护，被广泛应用于疫苗的研发中。选择恰当的免疫原和表达系统是疫苗研发中的两个重要技术难点。

综上所述，本领域迫切需要开发新型、高效狂犬病疫苗，它们可以诱导产生针对狂犬病毒的保护性抗体。

发明内容

本发明为克服现有技术的不足，提供一种狂犬病病毒修饰性mRNA疫苗及其制备方法，不但具有安全性高、免疫原性强以及易于生产等特点，而且具有技术先进性。

为实现上述目的，设计一种狂犬病病毒修饰性mRNA疫苗，其特征在于：所述的疫苗包括：