[发明专利]一种嵌合体抗原和抗金环蛇蛇毒制剂的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种嵌合体抗原，其特征在于，为马IgG的Fc和4个金环蛇蛇毒磷酸二酯酶的嵌合体蛋白；所述马IgG选自马IgG4、IgG1-3或IgG5-7；所述4个金环蛇蛇毒磷酸二酯酶为PA2B1突变截短体、PA2B2突变截短体、PA2B6突变截短体和PA2A截短体；

所述PA2B1突变截短体为序列号Q90WA7的第49位K突变为A并去除前端27个氨基酸残基；所述PA2B2突变截短体为序列号Q90WA8的第49位K突变为A并去除前端27个氨基酸残基；所述PA2B6突变截短体为序列号P00627的第23位K突变为A并去除前端17个氨基酸残基；所述PA2A截短体为序列号P0C551去除前端17个氨基酸残基。

2.如权利要求1所述的嵌合体抗原，其特征在于，包括I链和II链；所述I链由Fc的I链和分设在所述Fc的I链两端的PLA₂组成；所述II链由Fc的II链和分设在所述Fc的II链两端的PLA₂组成；所述Fc的I链和所述Fc的II链的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15所示；

所述PLA₂选自第一PLA₂、第二PLA₂、第三PLA₂或第四PLA₂；所述第一PLA₂、所述第二PLA₂、所述第三PLA₂和所述第四PLA₂的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示；所述嵌合体抗原有且仅有一个拷贝的所述第一PLA₂、所述第二PLA₂、所述第三PLA₂和所述第四PLA₂。

3.如权利要求2所述的嵌合体抗原，其特征在于，所述I链的核苷酸序列如SEQ ID NO:16所示；所示II链的核苷酸序列如SEQ ID NO:17所示。

4.一种马抗金环蛇蛇毒制剂的制备方法，其特征在于，所述马抗金环蛇蛇毒制剂包含马抗金环蛇蛇毒F(ab’)₂；所述马抗金环蛇蛇毒F(ab’)₂通过以灭活金环蛇蛇毒和如权利要求1-3任一项所述的嵌合体抗原混合物作为抗原，辅以佐剂，免疫马匹来制备获得‘；

所述佐剂包括SEB+IL-4+IL-6；所述SEB+IL-4+IL-6为金黄色葡萄球菌的SEB氨基酸序列、马IL-4的氨基酸序列和马IL-6的氨基酸序列通过链接肽连接组成的重组蛋白；所述金黄色葡萄球菌的SEB氨基酸序列、马IL-4的氨基酸序列和马IL-6的氨基酸序列分别如SEQID NO:21、SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:19所示；所述链接肽的氨基酸序列为5’-GGGGSGGGGSGGGGS-3’。

5.如权利要求4所述的马抗金环蛇蛇毒制剂的制备方法，其特征在于，所述SEB+IL-4+IL-6的核苷酸序列如SEQ ID NO:22所示。

6.如权利要求4所述的马抗金环蛇蛇毒制剂的制备方法，其特征在于所述佐剂还包括羊毛脂、花生油，且所述佐剂中羊毛脂与花生油的体积比为1：3，所述佐剂中所述SEB+IL-4+IL-6的浓度为10-20μg/ml。

7.如权利要求4所述的马抗金环蛇蛇毒制剂的制备方法，其特征在于，所述灭活金环蛇蛇毒与如权利要求1-3任一项所述的嵌合体抗原的混合比例为1：0.5-1，所述灭活金环蛇蛇毒与如权利要求1-3任一项所述的嵌合体抗原的总蛋白浓度为0.2mg/ml。