[发明专利]一种刺梨无刺1号无刺品系的特异分子标记及其应用

权利要求书

1.一种分子标记，其特征在于，由分子标记153.61和分子标记341.112组成；所述分子标记153.61的上游引物序列如SEQ ID No.1所示，下游引物序列如SEQ ID No.2所示；所述分子标记341.112的上游引物序列如SEQ ID No.3所示，下游引物序列如SEQ ID No.4所示。

2.一种特异性引物组合，其特征在于，含有核苷酸序列如SEQ ID No.1～SEQ ID No.4所示的引物。

3.一种含有如权利要求2所述的引物组合的试剂盒。

4.权利要求1所述的分子标记或权利要求2所述的引物组合或权利要求3所述的试剂盒在无刺刺梨育种中的应用。

5.一种分子标记的方法，其特征在于，将分子标记153.61和分子标记341.112的引物混合后扩增刺梨育种材料，如果能够同时扩增出500bp和100bp的扩增片段，则标志着所标记的育种材料为刺梨无刺1号无刺品系；所述分子标记153.61的上游引物序列如SEQ ID No.1所示，下游引物序列如SEQ ID No.2所示；所述分子标记341.112的上游引物序列如SEQ IDNo.3所示，下游引物序列如SEQ ID No.4所示。

6.一种检测刺梨无刺1号无刺品系的方法，其特征在于，用具体序列如SEQ ID No.1～SEQ ID No.4所示的引物对提取的刺梨基因组DNA进行PCR扩增；然后观察扩增结果，得出结论。

7.如权利要求6所述方法，其特征在于，所述扩增为双重PCR扩增，所述扩增反应的总体积为17.5～22.5μL，其中包括0.9～1.1μL DNA、153.61标记上下游引物各0.4～0.6μL、341.112标记上下游引物各0.4～0.6μL、6～8μL ddH₂O、9～11μLTaq DNA聚合酶。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述扩增反应的过程为：93～95℃预变性3～5min，93～95℃变性25～35s，45～55℃退火25～35s，70～74℃延伸35～45s，25～35个循环，最后总延伸5～8min，3～5℃保温。

9.如权利要求6所述方法，其特征在于，所述得出结论的方法为：如果能够同时扩增出特异的2条不同大小的500bp和100bp扩增片段，则标志着所检测的育种材料为刺梨无刺1号无刺品系。