[发明专利]一种用于直接PCR扩增的试剂及检测试剂盒和应用有效
| 申请号： | 202210205587.4 | 申请日： | 2022-03-04 |
| 公开（公告）号： | CN114277112B | 公开（公告）日： | 2022-05-24 |
| 发明（设计）人： | 董晋涛;金捷;杜赞花;其他发明人请求不公开姓名 | 申请（专利权）人： | 上海思路迪医学检验所有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686 |
| 代理公司： | 上海硕力知识产权代理事务所(普通合伙) 31251 | 代理人： | 杨用玲 |
| 地址： | 200120 上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 直接 pcr 扩增 试剂 检测 试剂盒 应用 | ||
1.一种用于直接PCR扩增的试剂，其特征在于，所述试剂包括的组分为：NP40、十二烷基肌氨酸钠、Tris-HCl 、麦芽糖、半乳糖醇、Taq酶、反转录酶、RNA酶抑制剂；各组分在PCR反应体系中的浓度为：NP40 体积百分比为0.1%~2%，十二烷基肌氨酸钠 体积百分比为0.1%~2%，Tris-HCl 30~50mM，麦芽糖 5wt%~10wt%，半乳糖醇 4wt%~6wt%，Taq酶 1-3U，反转录酶 5-20U，RNA酶抑制剂 5-20U。
2.如权利要求1所述的用于直接PCR扩增的试剂，其特征在于：所述十二烷基肌氨酸钠在PCR反应体系中的体积百分比为0.3%~2%。
3.如权利要求1所述的用于直接PCR扩增的试剂，其特征在于：所述NP40在PCR反应体系中的体积百分比为0.8%~1.2%，十二烷基肌氨酸钠在PCR反应体系中的体积百分比为0.4%~1%。
4.如权利要求1所述的用于直接PCR扩增的试剂，其特征在于：所述试剂还包括dNTP0.4~0.5mM、Mg2+ 2~5mM、KCl 30-50mM、硫酸铵 5~20mM、BSA 0.1wt%~1wt%。
5.权利要求1-4任一项所述的试剂在制备检测新冠病毒试剂盒中的应用。
6.如权利要求5所述的试剂在制备检测新冠病毒试剂盒中的应用，其特征在于：所述试剂盒对新冠病毒的ORF1ab基因，检测ORF1ab基因的引物如SEQ ID NO.1~2所示、探针如SEQID NO.3所示。
7.如权利要求5所述的试剂在制备检测新冠病毒试剂盒中的应用，其特征在于：所述试剂盒对新冠病毒的N基因进行检测，检测N基因的引物如SEQ ID NO.12~13所示、探针如SEQID NO.14所示。
8.如权利要求6或7所述的试剂在制备检测新冠病毒试剂盒中的应用，其特征在于：所述引物在PCR反应体系中的浓度为240~400nM，所述探针在PCR反应体系中的浓度为120~200nM。
9.如权利要求6或7所述的试剂在制备检测新冠病毒试剂盒中的应用，其特征在于：采用人源靶标RNase P作为内标，内标引物如SEQ ID NO.17~18所示、探针如SEQ ID NO.19所示。
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