[发明专利]一种针对特殊医学用途配方奶粉中牛磺酸含量的检测方法

权利要求书

1.一种针对特殊医学用途配方奶粉中牛磺酸含量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)配制标准品工作液：精确称取牛磺酸标准品，以水为溶剂配制牛磺酸的标准品工作液；

(2)提取奶粉待测样品中的牛磺酸：精确称取待测奶粉样品溶解于水中，超声后，加入沉淀剂，经涡旋混合均匀后，离心，提取上清液，并用纯水进行定容得到待测样品溶液；

(3)衍生处理：将步骤(1)和(2)中配制的标准品工作液和待测样品溶液中分别加入衍生化试剂，在碱性环境下进行衍生反应，反应结束后经膜过滤，得到标准品衍生产物和样品衍生产物；

(4)检测分析：采用二维液相系统对步骤(3)制备的标准品衍生产物和样品衍生产物进行检测，以研究并分析特医奶粉样品中牛磺酸的含量；所述二维液相系统包括一维液相体系和二维液相体系，以及用于连接所述一维液相体系和二维液相体系的六通阀；

其中：所述沉淀剂为亚铁氰化钾和乙酸锌，所述衍生化试剂为丹磺酰氯。

2.根据权利要求1所述的一种针对特殊医学用途配方奶粉中牛磺酸含量的检测方法，其特征在于，步骤(4)中，所述一维液相体系包括第一高效液相色谱体系和紫外检测器，所述二维液相体系包括第二高效液相色谱体系和荧光检测器；通过比较所述标准品衍生产物和样品衍生产物在所述一维液相体系中的保留时间，确定由所述一维液相体系切换至二维液相体系的时间，由所述二维液相体系精确测定特医奶粉样品中牛磺酸的含量。

3.根据权利要求1所述的一种针对特殊医学用途配方奶粉中牛磺酸含量的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，精确称取牛磺酸标准品100.0mg于100mL容量瓶，配制成浓度为1.0mg/mL的标准品储备液，将所述标准品储备液用水稀释成浓度为1.0、5.0、10.0、15.0、20.0μg/mL的标准品工作液备用。

4.根据权利要求1所述的一种针对特殊医学用途配方奶粉中牛磺酸含量的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，精确称取1.00±0.05g特医奶粉样品于50mL聚四氟乙烯塑料离心管中，加入35mL超纯水，超声10～20min，加入1mL 150g/L亚铁氰化钾溶液和1mL 300g/L乙酸锌溶液，涡旋5～10min进行均匀混合，去除基质中的蛋白质，以9000～10000r/min转速离心2～5min，将离心后的上清液转移至50mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度，制得待测样品溶液。

5.根据权利要求1所述的一种针对特殊医学用途配方奶粉中牛磺酸含量的检测方法，其特征在于，步骤(3)中，所述衍生化试剂为以乙腈为溶剂、浓度为15～45mg/mL的丹磺酰氯衍生液；并使用三乙胺作为缓冲溶液调整衍生反应的环境pH至9～11。

6.根据权利要求5所述的一种针对特殊医学用途配方奶粉中牛磺酸含量的检测方法，其特征在于，步骤(3)中，标准品工作液和待测样品溶液的衍生处理具体步骤为：分别取1mL需要衍生处理的溶液于10mL聚四氟乙烯塑料离心管中，加入1mL 30mg/mL丹磺酰氯衍生液，10μL三乙胺，60℃避光加热1.0±0.1h，加入0.1mL质量浓度为20mg/L的盐酸甲胺溶液终止反应，过0.22μm PTFE滤膜，制得标准品衍生产物和样品衍生产物待检测。

7.根据权利要求2所述的一种针对特殊医学用途配方奶粉中牛磺酸含量的检测方法，其特征在于，一维液相体系条件：一维色谱柱：Agilent XDB-C18(3.0mm×150mm,3.5μm)；柱温：35±1℃；进样量：20μL；流动相A1：0.1％三氟乙酸水；流动相B1：甲醇；流速：0.4mL/min；梯度洗脱程序见下表；紫外检测器：254nm。

8.根据权利要求7所述的一种针对特殊医学用途配方奶粉中牛磺酸含量的检测方法，其特征在于，所述一维液相体系切换至二维液相体系的时间为4.2min～5.2min。