[发明专利]一种针对特殊医学用途配方奶粉中牛磺酸含量的检测方法

说明书

本发明提供了一种针对特殊医学用途配方奶粉中牛磺酸含量的检测方法，包括如下步骤：(1)配制牛磺酸标准品工作液；(2)提取牛磺酸：精确称取待测奶粉样品溶解于水中，超声后加入沉淀剂混合均匀，离心提取上清液，定容得到待测样品溶液；(3)衍生处理：将步骤(1)和(2)中配制的标准品工作液和待测样品溶液中分别加入衍生化试剂丹磺酰氯，在碱性环境下进行衍生反应，得到标准品衍生产物和样品衍生产物；(4)检测分析：采用二维液相系统检测步骤(3)制备的样品衍生液中牛磺酸衍生产物的含量。本发明通过设计样品的前处理方法结合二维液相系统，解决了国标中无法准确分析特医奶粉中牛磺酸含量的问题，且检测准确性高。

技术领域

本发明涉及奶粉检测技术领域，具体涉及一种针对特殊医学用途配方奶粉中牛磺酸含量的检测方法。

背景技术

牛磺酸(Taurine,C₂H₇NO₃S,HO₃S-CH₂-CH₂-NH₂)化学名为β-氨基乙磺酸，是一种特殊的含硫非蛋白氨基酸，以游离状态分布于组织间液和细胞内液中。牛磺酸具有突出的生理药理作用，能调节机体内糖类和脂类的代谢，提高机体免疫力，维持渗透压平衡，增强细胞膜抗氧化能力等，对婴幼儿智力开发的促进和神经系统的发育也有重要作用。目前,牛磺酸已作为一种必备的营养强化剂添加在食品中,欧美等发达国家规定在婴幼儿食品中必须添加一定量的牛磺酸.我国食品安全国家标准也规定，为了改善婴儿配方食品的蛋白质质量，提高其营养价值，推荐婴幼儿配方乳制品中添加适当牛磺酸。

特殊医学用途配方奶粉(特医奶粉)主要包括：部分水解，深度水解和全氨基酸水解配方奶粉，是针对过敏体质婴儿专门设计的。婴幼儿免疫系统未完全发育以及胃肠道屏障发育不成熟，牛奶蛋白对婴幼儿来说是一种异种蛋白，牛奶中的β-乳球蛋白有很强的致敏性，极易出现婴幼儿牛奶蛋白过敏，造成便血，腹胀，甚至会导致患儿出现死亡以及过敏性休克。牛奶蛋白过敏的发病率为6％，已成为对婴幼儿健康成长发育产生影响的首要因素。水解配方奶粉在加工时将牛奶中的蛋白质部分水解或者完全水解，以降低过敏概率，但不会影响蛋白质的营养，已成为大多婴幼儿食用的首选。

特医奶粉的基质体系相对于普通婴儿配方奶粉复杂很多，蛋白质被水解后形成大量的氨基酸于基质中，对于牛磺酸的定量分析会造成严重的干扰。其中，薄层扫描法就很容易受到其余氨基酸的干扰，准确性较低；高效液相色谱——串联质谱法应用广泛，但对于奶粉本身的基质效应显著，重复性不理想；高效液相色谱——紫外检测，受到牛磺酸自身紫外吸收较弱的影响，灵敏度较低。

丹磺酰氯(二甲氨基—萘磺酰氯DNS-CL)是一种强荧光剂，能专一地与肽链N-端的α-氨基反应生成丹磺酰-肽，后者水解生成的丹磺酰-氨基酸具有很强的荧光信号。国标GB5009.169-2016中，传统婴儿配方奶粉在沉淀蛋白后，利用1.5mg/mL的DNS-CL衍生液在碱性条件下衍生，得到荧光产物，虽然采用上述方法检测普通的婴幼儿奶粉中给的牛磺酸，其回收率均能达到90％以上；但是由于在全氨基酸水解配方奶粉中，其余氨基酸同样可以与DNS-CL反应，导致牛磺酸的衍生反应不完全，其回收率都低于30％，相对标准偏差也较大，从而导致该法也无法对全氨基酸水解配方等特医奶粉中的牛磺酸含量进行准确定量。

因此，亟需设计一种针对特殊医学用途配方奶粉中牛磺酸含量的检测方法，以实现对特医奶粉，尤其是对全氨基酸水解配方奶粉中的牛磺酸含量进行高效、精准的检测。

发明内容

鉴于上述问题，本发明提供一种针对特殊医学用途配方奶粉中牛磺酸含量的检测方法，以用于准确定量全氨基酸水解配方奶粉中牛磺酸的含量。

本发明的技术方案如下：一种针对特殊医学用途配方奶粉中牛磺酸含量的检测方法，包括如下步骤：

(1)配制标准品工作液：精确称取牛磺酸标准品，以水为溶剂配制牛磺酸的标准品工作液；