[发明专利]一种复发肺癌穿刺样本类器官培养基及其应用

说明书

本发明公开了一种复发性肺癌穿刺样本类器官的培养基及其培养方法。通过调整培养基各组分的含量，能够实现对复发性肺癌穿刺样本的类器官培养，大大提高了肺癌类器官培养成功率，缩短培养周期，为揭示复发性肺癌发病机理和筛选抗癌药物奠定了基础。

技术领域

本发明涉及细胞培养领域，具体的涉及一种复发性肺癌类器官的培养基及其培养方法。

背景技术

肺癌居全球范围内癌症发病和死因之首，每年全球有180万新发肺癌病例，160万例死亡病例，因分期和地区不同，肺癌患者5年生存率在4％-17％。在中国的癌症死亡率中，肺癌仍然排名第一，2020年有72万国人死于肺癌，约占全球死亡人数一半。肺癌有临床症状发现时往往是晚期，因此患者已经丧失了手术根治的机会，一般选择靶向治疗，化疗或者放疗。肺癌是目前拥有最多靶向药的一个癌种，但众多的靶向药也给临床选药带来了纠结，面对同一个突变时，究竟哪种靶向药是最合适的，二代基因测序并不能给临床一个满意的回答。另外针对化疗药物的选择，目前只能根据指南和临床医生的经验选择，缺乏明确的个性化治疗的指导依据。

同时肺癌病人绝大多数在治疗过程中会出现靶向药物耐药，临床往往采取再次基因测序证实是否有新的突变继而采用新的靶向药物或化疗药物，在反复的耐药过程中，病人往往出现无药可用的局面，临床医生也束手无策，只能让病人直接试药，有没有一种可以代替病人试药的体外模型，这是临床肺癌治疗迫切需要解决的难题。

类器官是将具有干性潜能的细胞进行3D培养，从而形成相应器官的类似组织，类器官能最大程度地模拟体内组织结构及功能并能长期传代培养。目前已成功建立了肺、胃、小肠、大肠、肺脏、胰腺、前列腺等肿瘤类器官模型。肿瘤类器官的遗传背景与其来源肿瘤组织遗传背景高度一致：肿瘤类器官中的遗传突变与对应肿瘤活组织标本中的突变高度匹配，并与以往大规模的肿瘤突变分析结果相一致。肿瘤类器官也可以在基因表达谱、蛋白质谱、病理形态、肿瘤异质性等方面很好地模拟患者原位肿瘤。另外多项研究结果表明，类器官对药物的反应可以用来预测患者的临床疗效。例如一项关于囊性纤维化的研究表明，其类器官的药物反应情况与已发表的临床试验数据结果一致。2018年Science杂志一项最新研究表明，肿瘤类器官对药物的反应与转移性胃肠道肿瘤患者临床疗效高度一致，提示88％阳性预测率，100％的阴性预测率，为肿瘤类器官作为精准医疗的筛药工具提供了有力的支撑。

虽然原发肺癌类器官培养国内外已经有很多报道，但是复发肺癌穿刺样本因肿瘤细胞较少，原有培养体系不适合而培养成功率较低，因此复发肺癌穿刺样本类器官的成功培养和稳定药物敏感性测试可为复发肺癌的精准医疗提供可靠保证。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种适宜复发性肺癌穿刺样本的类器官培养的培养基，进而获得复发肺癌类器官，以便能够研究复发肺癌发病机制和病程以及筛选相关抗癌药物。

为解决上述技术问题，本发明第一方面提供一种复发肺癌的类器官培养基，所述培养基成分包括如下成分：

DMEM/F12K/1640培养基(1:1:1-2)，抗坏血酸(1-100mg/L)，L-谷氨酸(1-100mg/L)，亚硒酸钠(0.002-0.5mg/L)，乙醇胺盐酸盐(2-200mg/L)，偏钒酸铵(1×10^-4-20×10^-4mg/L)，四水合氯化锰(5×10^-5-50×10^-5mg/L)。

R-spondin1(50-1000ng/ml)，Noggin(10-200ng/ml)，N2:B27(0.1-2)，谷氨酰胺补剂(1×)，HEPES(1×)，烟酰胺(1-100mM)，Normocin^TM(1×)，N-乙酰半胱氨酸(0.1-10mM)，Wnt3a(10-500ng/ml)。

优选的，所述培养基中还包括肝素，进一步优选的，所述肝素浓度为10-200IU/ml。