[发明专利]一株野生型屎肠球菌ZK03及其电击转化方法和应用在审
| 申请号： | 202210207479.0 | 申请日： | 2022-03-03 |
| 公开（公告）号： | CN114480211A | 公开（公告）日： | 2022-05-13 |
| 发明（设计）人： | 王玮;谢改杰;金鑫鑫;张雪;黄燕华;曲庆 | 申请（专利权）人： | 仲恺农业工程学院 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12N13/00;C12N15/74;A01N63/20;A01P1/00;A01P3/00;A23K10/18;C12R1/01 |
| 代理公司： | 长春众邦菁华知识产权代理有限公司 22214 | 代理人： | 于晓庆 |
| 地址： | 510220 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 野生型 球菌 zk03 及其 电击 转化 方法 应用 | ||
1.一株野生型屎肠球菌(Enterococcus faecium)ZK03，其特征在于，该菌株已于2022年1月5日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为：GDMCC No:62192。
2.根据权利要求1所述的一株野生型屎肠球菌(Enterococcus faecium)ZK03，其特征在于，该菌株不含有肠球菌毒力因子Asa1、cylA、efaA、esp、gelE和hyl。
3.如权利要求1所述的一株野生型屎肠球菌(Enterococcus faecium)ZK03的电击转化方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、野生型屎肠球菌(Enterococcus faecium)ZK03感受态细胞的制备
将活化的野生型屎肠球菌(Enterococcus faecium)ZK03接种于含1～3％(M/V)甘氨酸的改良培养基中，培养至平台期或平台后期，收集菌液，冰浴、离心收集菌体，用含30％(M/V)PEG1000的电击缓冲液进行洗涤、重悬，置于-80℃保存；
步骤二、电击转化
按体积比为3:1的比例取野生型屎肠球菌(Enterococcus faecium)ZK03感受态细胞和穿梭质粒PAMB401，冰浴后混匀，加入预冷的电转杯中静置后，电击1次，电压为1400～2450V，电击时间为4～5ms；加入复苏培养基，取培养物涂布于筛选培养基中，完成电击转化过程。
4.根据权利要求3所述的电击转化方法，其特征在于，步骤一中，所述改良培养基为含有171.15g/L蔗糖和2％(M/V)甘氨酸的BHI液体培养基。
5.根据权利要求3所述的电击转化方法，其特征在于，步骤一中，所述电击缓冲液的配制方法为：取100ml超纯水经高压湿热灭菌处理后冷却至50～60℃，加入30g PEG1000，0.45μm滤膜过滤除菌即得。
6.根据权利要求3所述的电击转化方法，其特征在于，步骤二中，所述穿梭质粒PAMB401的制备过程如下：采用人工合成的方法获得bcaA启动子序列，再用XbaⅠ、SalⅠ双酶切，将pAM401载体的多克隆位点XbaⅠ、SalⅠ双酶切后形成线性载体，将线性载体与bcaA启动子用T4连接酶连接，组成新的环状穿梭表达载体PAMB401。
7.根据权利要求3所述的电击转化方法，其特征在于，步骤二中，所述穿梭质粒PAMB401的浓度为0.053-1.092μg/μL。
8.根据权利要求3所述的电击转化方法，其特征在于，步骤二中，所述电压为1400V。
9.根据权利要求3所述的电击转化方法，其特征在于，步骤二中，所述复苏培养基为含有171.15g/L蔗糖的BHI液体培养基；所述筛选培养基为含有氯霉素抗性的BHI琼脂固体培养基。
10.如权利要求1所述的一株野生型屎肠球菌(Enterococcus faecium)ZK03在制备抑菌剂或饲料添加剂中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于仲恺农业工程学院，未经仲恺农业工程学院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202210207479.0/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
