[发明专利]用于酿酒酵母多拷贝整合的质粒工具包在审
| 申请号： | 202210208817.2 | 申请日： | 2022-03-04 |
| 公开（公告）号： | CN114574517A | 公开（公告）日： | 2022-06-03 |
| 发明（设计）人： | 周景文;高松;余世琴;曾伟主;陈坚 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N15/67;C12N15/65;C12N15/90;C12N15/61;C12N1/19;C12R1/865 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 仇钰莹 |
| 地址： | 214122 江苏省无锡市滨*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 酿酒 酵母 拷贝 整合 质粒 工具包 | ||
1.酿酒酵母基因表达框，其特征在于，所述表达框由弱启动子和带有降解标签deg的筛选基因组成；所述弱启动子包括PADE6，所述筛选基因为ScTRP1，将筛选基因ScTRP1的起始密码子替换为GUG或AAG。
2.根据权利要求1所述的基因表达框，其特征在于，将起始密码子替换为AAG的筛选基因ScTRP1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；将起始密码子替换为GUG的筛选基因ScTRP1的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.根据权利要求2所述的基因表达框，其特征在于，所述降解标签deg的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
4.根据权利要求3所述的基因表达框，其特征在于，所述启动子PADE6的核苷酸序列如SEQID NO.3所示。
5.酿酒酵母整合质粒，其特征在于，含有权利要求1～4任一所述基因表达框。
6.根据权利要求5所述的酿酒酵母整合质粒，其特征在于，所述整合质粒由Ty转座子的上下游同源臂序列、终止子序列及目的蛋白表达框及权利要求1～4所述基因表达框组成；按Ty转座子的上游同源臂、上游终止子序列、绿色荧光蛋白表达框、下游终止子序列、反向的基因表达框、Ty转座子的下游同源臂的顺序连接。
7.根据权利要求6所述的酿酒酵母整合质粒，其特征在于，所述Ty转座子包括酿酒酵母基因组上的Ty1Cons、Ty2Cons、Ty3Cons和Ty4Cons；所述上游终止子序列包括TRFC5-TPOL30、TMTD1-TRPF2、TDSF1-THXT13、TRRP12-TTAF3或TADH1；所述下游终止子序列包括TSEC13-TPNP1、TLEU2-TNFS1、TTIM21-TGSC2、TRNA14-TBUB2或TCYC1及反向的TTDH3终止子。
8.根据权利要求6或7所述的酿酒酵母整合质粒，其特征在于，所述目的蛋白表达框包括一个启动子PGAL7，启动子PGAL7的上游包含一个终止子序列TGAL10，启动子PGAL7下游为绿色荧光蛋白。
9.权利要求1～4任一所述基因表达框，或权利要求5～8任一所述重组质粒在构建及筛选高拷贝酿酒酵母、或在酿酒酵母过表达外源基因中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述酿酒酵母包括酿酒酵母CEN.PK2-1及其衍生菌株和/或酿酒酵母S288c及其衍生菌株。
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