[发明专利]一种单抗细胞培养液的纯化方法

说明书

本发明提供了一种单抗细胞培养液的纯化方法，具体地，本发明提供了一种地舒单抗细胞培养液的纯化方法，该方法是采用细胞培养液离心后，深层过滤，任选地，在离心后、深层过滤前进行酸沉降与絮凝。本发明的纯化方法能够大幅降低生产成本，并能够获得收率在90％以上、浊度小于20NTU的目标细胞培养液，适于工业化生产。

技术领域

本发明属于抗体药物纯化方法领域，具体涉及地舒单抗细胞培养液的纯化方法。

背景技术

地舒单抗是一种新型的抗RANKL(核因子κ-B配体的受体激动剂)的全人化单克隆IgG2抗体，分子量约为147kD，对可溶性、跨膜形式的人RANKL具有高度亲和力和特异性。与RANK结合后，可抑制破骨细胞的活性，降低骨吸收。临床上用于多发性骨髓瘤和实体瘤骨转移相关事件、不可手术切除的骨巨细胞瘤等疾病的治疗。

地舒单抗作为一种单克隆抗体药物，其生产工艺一般采用真核细胞进行培养，培养液再经收获、澄清、纯化、罐装、加塞等工艺制备而成。

深层过滤法是指采用硅藻土、纤维素、助滤剂等过滤介质，形成孔径大小不一的立体过滤网络，不仅过滤尺寸大于过滤孔径的颗粒物质，同时，对尺寸小于过滤孔径的颗粒物质，过滤介质利用静电或疏水等作用，吸附颗粒性物质，从而达到使溶液澄清的作用。深层过滤对细胞培养液中的死亡细胞、细胞碎片及其它颗粒性物质等具有很好的澄清效果。

深层过滤法，由于其固定资产投资少，澄清效果好，生产工艺可线性放大，常用来进行细胞培养液的澄清。但深层过滤介质表面与颗粒物质的静电或疏水作用等为弱相互作用，并存在一定的包含度，与过滤介质结合不牢的细小颗粒可能随着流体的冲刷而进入滤液，因此，过滤后的溶液经常还含有一定量的颗粒物质，存在一定的浊度。另外，深层过滤介质不可清洗，属于一次性产品，使用价格昂贵，过滤成本高。

离心，指利用离心机转子高速旋转产生的强大离心力，加快溶液中颗粒的沉降速度，将溶液中颗粒性物质沉淀出来，从而达到澄清溶液的作用。但由于料液中含有的细小颗粒性物质，在一般的离心转速下，难以沉淀。虽增大离心速度，可将其沉淀，但增大的离心速度可能将完整的细胞破碎，释放胞内物质，如细胞器、核酸、宿主蛋白等，从而产生新的杂质。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明技术人员采用离心和深层过滤结合工艺，即细胞培养液首先经离心工艺，去除沉降系数大的颗粒性物质，然后，再经深层过滤，除去沉降系数小的颗粒性物质，从而达到使料液澄清的目的。在深层过滤工艺前增加离心工艺，去除大部分颗粒性物质，减轻深层过滤的负担，降低深层过滤膜的使用数量及成本。

优选地，在离心后、深层过滤前进行酸沉降与絮凝步骤，所述酸沉淀与絮凝是使用酸溶液调节离心液中的pH至4-6；

通过所述酸沉降与絮凝步骤，促进料液中细小的颗粒性蛋白等杂质沉淀或絮凝，以增大其体积，便于深层过滤膜胞拦截或吸附。

本发明的具体技术内容如下：

纯化地舒单抗细胞培养液的方法，细胞培养液离心后，深层过滤。

进一步地，根据本发明地舒单抗细胞培养液的纯化方法，包括以下步骤：

1)细胞培养液加入离心机进行连续流离心；

2)离心液经二级深层过滤器过滤，得到目标细胞培养液。

进一步地，根据本发明地舒单抗细胞培养液的纯化方法，所述离心液经二级深层过滤器过滤的流速选自100-300LMH。

进一步地，根据本发明地舒单抗细胞培养液的纯化方法，所述二级深层过滤器为23cm²二级深层过滤器。

进一步地，根据本发明地舒单抗细胞培养液的纯化方法，步骤2)离心液体积选自1000L-5000L，优选2000L。