[发明专利]一种磁珠法病毒核酸提取试剂盒以及使用方法

说明书

本发明公开了一种磁珠法病毒核酸提取试剂盒以及使用方法，包括裂解液、磁珠液、洗涤液Ⅰ、洗涤液Ⅱ、洗涤液Ⅲ及洗脱液，所述所述裂解液由以下物质组成：Tris‑HCl，硫氰酸胍，EDTA，Triton‑100，PEG‑6000，SDS，异丙醇，水。本发明的有益效果是，本发明提供的裂解液，无需使用蛋白酶K从而节省成本，通常样本裂解时需要加热裂解，会加速有机溶剂的挥发，对操作人员的健康有危害，本发明无需加热裂解液，可减少对操作人员的危害。通过发明人研究裂解液的各组分配比，获得了提取核酸的裂解液配方。

技术领域

本发明涉及医疗领域，特别是一种磁珠法病毒核酸提取试剂盒以及使用方法。

背景技术

近年来，分子生物学飞速发展，随着PCR与PR-PCR在病毒检测的应用越来越广泛，核酸提取工作量飞速增加，传统的提取核酸方法步骤繁琐，需要使用苯酚或氯仿等方法抽提，时间长且毒性大，且不支持自动化提取，从而导致不能满足大批量疾病检测的要求。

市面上也出现了比传统核酸提取方法操作简单便捷的核酸提取技术，主要包括：层析柱法与磁珠法。由于层析柱核酸提取技术需离心柱配套使用且需要自动化离心设备，成本较高，目前层析柱核酸提取仍以手工提取为主，效率低。

而磁珠法核酸提取，仅需要一种可用于核酸分离的磁珠与磁分离装置（磁力架）即可提取，操作简单，成本较低，并可进行自动化提取，实现大批量样本抽提。

发明内容

本发明的目的是为了解决上述问题，设计了一种磁珠法病毒核酸提取试剂盒以及使用方法。

实现上述目的本发明的技术方案为，本发明提供一种磁珠法病毒核酸提取试剂，其特征在于包括：裂解液、磁珠液、洗涤液Ⅰ、洗涤液Ⅱ、洗涤液Ⅲ及洗脱液。

第一方面，所述裂解液包括Tris-HCl、硫氰酸胍、EDTA、Triton-100、PEG-6000；SDS；异丙醇；其中Tris-HCl为0.1M-0.5M；硫氰酸胍为3-5M；EDTA为10-40mm；PEG-6000占总质量的2-5%；SDS占总质量1%-3%；Triton-100占总质量的4.5-9%；异丙醇占总质量的5-15%。

所述磁珠液为外购磁珠，磁珠浓度为20-50mg/mL

所述洗涤液Ⅰ包括Tris-HCl、盐酸胍，其中盐酸胍为1-3M,PH为5.0~7.0

所述洗涤液Ⅱ为60-75%乙醇

所述洗涤液Ⅲ为75~85%乙醇

所述洗脱液为TE缓冲液，包括EDTA、Tris-HCl

第二方面，本发明还提供了一种磁珠法病毒核酸提取试剂盒的使用方法，包括以下步骤：

向样本中加入裂解液、磁珠，室温混匀裂解

将装有混合液的离心管置于磁力架，待磁珠完全被吸附后，弃掉上清液

加入所述洗涤液Ⅰ混匀后，将装有混合液的离心管置于磁力架，待磁珠完全被吸附后，弃掉上清液

加入所述洗涤液Ⅱ混匀后，将装有混合液的离心管置于磁力架，待磁珠完全被吸附后，弃掉上清液

加入所述洗涤液Ⅲ混匀后，将装有混合液的离心管置于磁力架，待磁珠完全被吸附后，弃掉上清液

将磁珠晾干后，加入所述洗脱液，50-80℃温育洗脱后，收集核酸液并保存。

一种磁珠法病毒核酸提取试剂盒，包括：试剂瓶、试剂密封帽以及密封结构；

所述试剂瓶与实际密封帽之间通过螺纹啮合，所述密封结构位于密封帽与试剂瓶的瓶口之间；

所述试剂密封帽包含：密封面板、面板塞、弹性顶柱；

所述密封面板位于面板塞上，弹性顶柱位于密封帽与密封面板之间；

还包括：环状密封盘、环形密封条、以及环形连接体；