[发明专利]一种植物油料油脂甾醇含量的速测方法及速测试剂盒

权利要求书

1.一种植物油料油脂甾醇含量的速测试剂盒，其特征在于：包括甾醇提取液稀释用缓冲液、甾醇氧化酶和甾醇测试板，所述甾醇氧化酶用于催化提取液中甾醇产生过氧化氢，所述甾醇测试板中装载有冻干显色剂，所述的冻干显色剂包括辣根过氧化物酶、柠檬酸、冻干保护剂和3,3',5,5'-四甲基联苯胺，质量比为8～250：3.5～10.5：0.6～3.0：5～50；所述的冻干保护剂由蔗糖和牛血清白蛋白以及，吐温20或十二烷基苯磺酸钠组成。

2.根据权利要求1所述的速测试剂盒，其特征在于：所述冻干保护剂中：蔗糖；牛血清白蛋白；吐温20或十二烷基苯磺酸钠为0.3～1.5：0.15～0.75：0.15～0.75。

3.根据权利要求1所述的速测试剂盒，其特征在于：所述的甾醇提取液稀释用缓冲液为：0.05～0.10mol/L pH 7.0的2-(N-吗啉代)乙磺酸水溶液。

4.根据权利要求1所述的速测试剂盒，其特征在于：所述的冻干显色剂为由辣根过氧化物酶水溶液、柠檬酸水溶液、3,3',5,5'-四甲基联苯胺无水乙醇溶液和含蔗糖、牛血清白蛋白、吐温20或十二烷基苯磺酸钠的溶液混合冻干得到，具体制备方法如下：配置辣根过氧化物酶水溶液，柠檬酸水溶液，冻干保护液，3,3',5,5'-四甲基联苯胺乙醇溶液，混合，冻干，混合体系中：各物质的浓度范围：8～250mg/mL，3.5～10.5mg/ml，0.6～3.0mg/mL，15～50mg/mL；其冻干保护液由0.3～1.5mg/mL蔗糖、0.15～0.75mg/mL牛血清白蛋白、0.15～0.75mg/mL吐温20或0.15～0.75mg/mL十二烷基苯磺酸钠水溶液组成；

所述的甾醇测试板上设有微孔；所述的冻干保护液直接置于甾醇测试板上的微孔中冻干，得到装载有冻干显色剂的甾醇测试板。

5.一种植物油料油脂甾醇含量的速测方法，其特征在于：步骤如下：提供植物油料油脂样品的甾醇提取溶液，用甾醇提取液稀释用缓冲液稀释得到样液，取样液加入到甾醇测试板中，加入甾醇氧化酶进行振荡反应，基于甾醇测试板的溶液颜色深浅与甾醇含量成正相关，获得植物油料油脂甾醇含量；

所述甾醇氧化酶用于催化提取液中甾醇产生过氧化氢，所述甾醇测试板中固定有冻干显色剂，所述的冻干显色剂包括辣根过氧化物酶、柠檬酸、冻干保护剂和3,3',5,5'-四甲基联苯胺，质量比为8～250：3.5～10.5：0.6～3.0：5～50；所述的冻干保护剂由蔗糖和牛血清白蛋白以及，吐温20或十二烷基苯磺酸钠组成。

6.根据权利要求5所述的速测方法，其特征在于：所述振荡反应时间30～60min，振荡反应温度为37～42℃；

所述甾醇氧化酶的用量为10～50μL，浓度为15～25U/mL。

7.根据权利要求5所述的速测方法，其特征在于：所述植物油料油脂样品为植物油料样品以及食用植物油样品；

所述样液的用量为100～150μL；

样品提取方法根据检测需要进行选择，具体地，所述的植物油料油脂甾醇含量检测中：

提取植物油料油脂样品中的总甾醇，进行样品中甾醇总量的检测，

或提取植物油料油脂样品中的游离甾醇，进行样品中游离甾醇含量的检测；

所述的甾醇氧化酶为胆固醇氧化酶，酶活力为≧25U/mg。

8.根据权利要求5所述的速测方法，其特征在于：所述的定量检测为：用标准品β-谷甾醇浓度建立标准曲线，将待测样品检测信号代入标准曲线得到样品中甾醇含量。

9.根据权利要求5或8所述的速测方法，其特征在于：所述的定量检测为：使用酶标仪检测，基于酶标仪检测OD值和标准品甾醇浓度绘制标准曲线，基于标准曲线定量检测获得甾醇含量。

10.根据权利要求9所述的速测方法，其特征在于：所述的酶标仪检测特征波长为450nm。