[发明专利]一种植物油料油脂甾醇含量的速测方法及速测试剂盒

说明书

本发明涉及一种植物油料油脂甾醇含量的速测方法及速测试剂盒。速测方法：提供植物油料油脂样品的甾醇提取溶液，用甾醇提取液稀释用缓冲液稀释得到样液，取样液加入到甾醇测试板中，加入甾醇氧化酶进行振荡反应，基于甾醇测试板的溶液颜色深浅与甾醇含量成正相关，获得植物油料油脂甾醇含量。本发明的方法操作简便、测试速度快，费用低，适用于植物油料油脂中甾醇含量的快速检测，为高甾醇材料筛选、品种选育和加工企业原料产品质量控制提供技术支撑。

技术领域

本发明属于农产品质量安全检测领域，具体涉及一种植物油料油脂甾醇含量的速测方法及速测试剂盒。

背景技术

中国是油料油脂的生产大国和消费大国，植物油料油脂是人类膳食甾醇的主要来源，其提供的植物甾醇占膳食甾醇总摄入量40％，因此测定植物油料油脂中的甾醇含量具有重要意义。

植物甾醇是以环戊烷多氢菲为骨架的三萜类化合物，是油料作物的一组特异性次生代谢物，广泛存在于植物的根、茎、叶、果实和种子中。目前已报道的植物甾醇超过200多种，其中以β-谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇和菜籽甾醇最为常见。植物甾醇是植物在生长过程中产生的一种次级代谢产物，具有降低胆固醇、抗氧化、抗炎症、增强免疫力等作用，对心血管疾病、癌症等慢性疾病具有很好的预防及治疗效果，受到国内外学者的广泛关注。植物甾醇在植物油中的含量和组成能够反映油料的种类。植物甾醇在不同油料作物和植物油中的组成和含量不同，因此可将其作为衡量植物油品质的特异性标志物。

目前，油料油脂中甾醇含量测定大多采用GC、GC-MS、HPLC或HPLC-MS等检测技术，实现甾醇分量以及甾醇总量的准确测定，上述方法检测准确、灵敏度高，广泛应用于油料油脂中甾醇的定性定量分析以及基于甾醇组成的食用油掺伪鉴别等。但这些方法需要借助大型仪器，耗时较长、成本高，无法实现快速检测。因此，急需一种现场快速检测植物油料油脂甾醇检测方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种植物油料油脂甾醇含量的速测方法及速测试剂盒。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种植物油料油脂甾醇含量速测试剂盒，包括甾醇提取液稀释用缓冲液、甾醇氧化酶和甾醇测试板，所述甾醇氧化酶用于催化提取液中甾醇产生过氧化氢，所述甾醇测试板中固定有冻干显色剂，所述的冻干显色剂包括辣根过氧化物酶、柠檬酸、冻干保护剂和3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)，质量比为：8～250；3.5～10.5；0.6～3.0；15～50；所述的冻干保护剂由蔗糖和牛血清白蛋白以及，吐温20或十二烷基苯磺酸钠(SDS)组成。

按上述方案，所述冻干保护剂中：蔗糖；牛血清白蛋白；吐温20或十二烷基苯磺酸钠(SDS)为0.3～1.5；0.15～0.75；0.15～0.75。

按上述方案，甾醇提取液稀释用缓冲液为：0.05～0.10mol/L pH 7.0的2-(N-吗啉代)乙磺酸水溶液。

按上述方案，所述的冻干显色剂为由辣根过氧化物酶水溶液、柠檬酸水溶液、3,3',5,5'- 四甲基联苯胺(TMB)无水乙醇溶液和含蔗糖、牛血清白蛋白、吐温20或十二烷基苯磺酸钠(SDS)的溶液混合冻干得到。

具体制备方法如下：配置辣根过氧化物酶水溶液，柠檬酸水溶液，冻干保护液， 3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)乙醇溶液，混合，冻干，混合体系中：各物质的浓度范围：8 ～250mg/mL，3.5～10.5mg/ml，0.6～3.0mg/mL，15～50mg/mL；所述的冻干保护液中各组分的浓度为：0.3～1.5mg/mL蔗糖、0.15～0.75mg/mL牛血清白蛋白、0.15～0.75mg/mL 吐温20或0.15～0.75mg/mL十二烷基苯磺酸钠。

按上述方案，所述的甾醇测试板上设有微孔；所述的真空冷冻干燥为：直接置于甾醇测试板上的微孔中冻干，得到装载有冻干显色剂的甾醇测试板。