[发明专利]一种弹性蛋白肽及其制备方法

说明书

本发明公开了一种弹性蛋白肽及其制备方法。以弹性蛋白为原料，添加水和胰酶，低温混合处理一定时间后，去除上清液得到沉淀；将沉淀与水混合，调节溶液pH值，升温，酶解，灭酶，离心，浓缩，干燥，即得到弹性蛋白肽。本发明方法所制备的弹性蛋白肽具有较高的蛋白回收率和弹性蛋白酶抑制活性，且能回收部分蛋白酶。

技术领域

本发明属于畜禽及水产加工副产物的高值化利用领域，具体涉及一种弹性蛋白肽及其制备方法。

背景技术

弹性蛋白是一种存在于多个结缔组织(皮肤、心脏动脉、肺、软骨)中的重要结构，由成纤维细胞和角质形成细胞合成分泌，具有良好的弹性和独特的生理功能。虽然弹性蛋白仅占皮肤总蛋白含量的2～4％，但它对皮肤结构和功能的维持至关重要，可提供皮肤抗拉强度和持久弹性。弹性蛋白不溶于水、弱酸或弱碱溶液。从氨基酸组成来看，弹性蛋白富含甘氨酸、脯氨酸、丙氨酸、亮氨酸和缬氨酸等非极性氨基酸，通常以含有大量的3-9个氨基酸组成的重复序列，形成灵活且稳定的结构。

在皮肤老化过程中，基质金属蛋白酶的上调导致了明显的弹性蛋白或胶原蛋白的降解，加速皮肤弹性劣变，加速皮肤老化。弹性蛋白酶是基质金属蛋白酶的一种，可通过降解各种细胞外基质成分并激活其他MMP来加速皮肤细胞基质蛋白水解，从而造成皮肤老化。因此，抑制弹性蛋白酶活性是弹性蛋白肽的重要生理活性。刘洋利用Alcalase水解牛弹性蛋白，得到得到了其序列分别为PY,GLPY,GLGPGV和GPGGVGAL四种多肽。通过对以上肽段分子化学合成，进一步发现四条肽段中GLPY的弹性蛋白酶抑制活性最强，在10mM浓度下抑制率为58.77％，其次为GPGGVGAL和GLGPGVG，PY的弹性蛋白酶抑制活性最弱。除GLGPGVG对弹性蛋白酶的抑制类型属于竞争性抑制外，其他三个多肽均为混合抑制类型。GLPY对弹性蛋白酶具有最强的亲和力(6.4kcal/mol)，其与弹性蛋白酶之间可形成5个键长较短的氢键，这可能是其具有最佳弹性蛋白酶抑制活性的主要原因。此外，在GLGPGVG、GPGGVGAL及PY和弹性蛋白酶的之间可分别观察到5个、3个及1个氢键，说明这四种多肽可以通过与弹性蛋白酶发生分子相互作用以抑制其活性。该工艺酶制剂的添加量为2％，酶解时间达24h的蛋白回收率也不到50％，水解度不到3％。(刘洋.弹性蛋白肽的抗皮肤光老化功效及其作用机制研究[D].华南理工大学,2019.)。

一种从牛软骨中提取弹性蛋白肽的方法公开了一种从牛软骨中提取弹性蛋白肽的方法，包括以下步骤：将牛软骨研磨成粉；将粉末转移至提取罐，加入粉末重量3-4倍的纯净水，升温至95℃，搅拌并持续2小时；降温至50℃-55℃后加入复配蛋白酶，反应结束后灭酶得到酶剪切液；降温至50-60℃，进行脱色脱味处理；采用渗透膜进行溶质和溶剂分离；采用纳滤膜进行150-1000Dal有机小分子的分离；浓缩、喷雾干燥。其利用蛋白肽以及非肽物质对热的稳定性不同，对牛软骨粉末进行高温提取，提取液经复配蛋白酶剪切再经不同的渗透膜浓缩过滤，得到分子量在150-1000Da范围内的小肽，且该分子量范围的肽占肽的85％以上，可以大大增加吸收效率。该发明未提及牛软骨酶解的蛋白回收率，也未提及酶解产物的弹性蛋白酶抑制活性。

鲣鱼弹性蛋白肽与胶原蛋白低聚肽的组合物及其制备方法公开了鲣鱼弹性蛋白肽与胶原蛋白低聚肽的组合物及其制备方法，所述鲣鱼弹性蛋白肽与胶原蛋白低聚肽的组合物的制备原料以重量份计，包括胶原蛋白低聚肽750～870、弹性蛋白肽5～12，本发明不仅能够抵御肌肤衰老，激活人体真皮层纤维细胞、显著促进人体胶原蛋白和弹性蛋白合成，具有保持肌肤弹性的作用；而且，还能改善肌肤的弹性和柔软度、增强血管弹性，缓解血管衰老、促进韧带细胞增殖，提高韧带功能以及增加关节稳定效果，巩固和恢复运动机能，抑制韧带骨化。该发明未提及酶解产物的蛋白回收率，也未提及酶解产物的弹性蛋白酶抑制活性。