[发明专利]肺癌类器官培养液及其培养试剂组合和培养方法

权利要求书

1.一种肺癌类器官培养液，其特征在于，包括完全培养基和自源条件培养基，所述完全培养基与所述自源条件培养基的体积比为1～3﹕1；

其中，所述完全培养基包括条件培养基、基础培养基、复合抗生素和生长因子；所述条件培养基与所述基础培养基的体积比为1～4﹕1；所述基础培养基包括Advanced DMEM/F12，HEPES 5～15 mM和Glutamax 0.5x～1.5x；所述复合抗生素包括Primocin 50～500μg/mL，青霉素-链霉素0.5x～1.5x和甲硝唑2～10 μg/mL；所述生长因子包括：EGF 10～100 ng/mL，FGF-10 10～100 ng/mL，N2 0.25x～1.5x，B27 0.25x～1.5x，n-Acetylcysteine 1～2mM， Nicotinamide 5～20 mM，Gastrin 5～20 nM，Prostaglandin E2 0.2～2 μM，Y-276325～15 μM；所述条件培养基包括Wnt-3a条件培养基，R-spondin1条件培养基和Noggin条件培养基，所述Wnt-3a条件培养基，R-spondin1条件培养基和Noggin条件培养基分别采用Wnt-3a、R-spondin1和Noggin过表达细胞株的目的细胞系分别进行培养而获得，按体积百分比，所述Wnt-3a条件培养基为20%，R-spondin1条件培养基为50%，Noggin条件培养基为30%；

自源条件培养基是利用肿瘤相关成纤维细胞培养基对肺癌组织提取的自源肿瘤纤维细胞进行培养获得；且所述自源条件培养基中至少包括自源生长因子、自源白介素因子、自源趋化因子，自源基质金属蛋白酶和自源其他因子；所述自源其他因子包括SDF1、VEGFA、TGFβ、PDGFα和PGE2。

2.根据权利要求1所述的肺癌类器官培养液，其特征在于，所述生长因子包括：EGF 50ng/mL，FGF-10 50 ng/mL，N2 0.75x～1x，B27 0.75x～1x，n-Acetylcysteine 1.25～1.5mM，Nicotinamide 8～10 mM，Gastrin 8～10 nM，Prostaglandin E2 0.5～1 μM，Y-276328～10 μM。

3.根据权利要求1所述的肺癌类器官培养液，其特征在于，

所述复合抗生素包括Primocin 100 μg/mL，青霉素-链霉素1x和甲硝唑4 μg/mL。

4.根据权利要求1、2或3所述的肺癌类器官培养液，所述自源条件培养基是通过以下培养方法获得的：

提取自源肿瘤相关成纤维细胞，传代并建系，获得自源肿瘤纤维细胞；

采用肿瘤相关成纤维细胞培养基对所述自源肿瘤纤维细胞进行培养；其中，所述肿瘤相关成纤维细胞培养基包括：DMEM基础培养基+5%血清+3%PS；

培养3天至5天后，收集培养基，并对收集的培养基进行离心处理，获得自源条件培养基。

5.一种肺癌类器官培养试剂组合，其特征在于，包括：酶解液和如权利要求1至4中任一项所述的肺癌类器官培养液；所述酶解液包括基础培养基、Ⅰ型胶原酶、Ⅲ型胶原酶和Primocin；其中，所述Ⅰ型胶原酶的浓度为0.1～2 mg/mL，所述Ⅲ型胶原酶的浓度为0.1～1mg/mL，所述Primocin的浓度为0.2～2 mg/mL；所述肺癌类器官培养液与所述酶解液独立包装。

6.根据权利要求5所述的肺癌类器官培养试剂组合，其特征在于，所述酶解液，包括基础培养基、Ⅰ型胶原酶、Ⅲ型胶原酶和Primocin；其中，所述Ⅰ型胶原酶的浓度为1.5mg/mL，所述Ⅲ型胶原酶的浓度为0.5mg/mL，所述Primocin的浓度为1.5 mg/mL。