[发明专利]肺癌类器官培养液及其培养试剂组合和培养方法

说明书

本申请涉及生物组织工程技术领域，公开一种肺癌类器官培养液及其培养试剂组合和培养方法，所述肺癌类器官培养液包括完全培养基和自源条件培养基；完全培养基包括条件培养基、基础培养基、复合抗生素和生长因子；自源条件培养基是利用肿瘤相关成纤维细胞培养基对肺癌组织提取的纤维细胞进行培养获得。培养液各组分之间协同作用，加快肺癌类器官细胞的形成和生长，增加细胞收获数量的同时还提高培养速度；而且体外培养的类器官更加仿生，能够适用于肺癌类器官的个性化培养，能够维持每一例病人原发组织的形体结构与病理特征。

技术领域

本申请涉及生物组织工程技术领域，例如涉及一种肺癌类器官培养液及其培养试剂组合和培养方法。

背景技术

肺癌是我国的十大恶性肿瘤之一。目前，肺癌的病因尚未完全清楚，目前认为主要是环境因素与遗传因素综合作用的结果。肺癌类器官对研究具有很重要的意义。目前虽有一些肺癌类器官培养基的研究报道，但是其培养过程生长慢，增加时间投入成本；且仿生性低。

在实现本申请实施例的过程中，发现相关技术中至少存在如下问题：现有肺癌类器官的培养过程中，每次传代至少需要培养14天，甚至更多天，才达到传代要求。而且，获得的细胞量也非常少，为了收获更多的细胞，进行下游试验，需要时间更长，使得整个器官的构建过程缓慢，导致肺癌类器官研究的时间成本高，除此之外，更为重要的是，类器官体外培养一段时间后，会发生EMT转变，逐渐丧失体内的间质特性，跟体内真实的肿瘤特性差异会比较大。

发明内容

为了对披露的实施例的一些方面有基本的理解，下面给出了简单的概括。所述概括不是泛泛评述，也不是要确定关键／重要组成元素或描绘这些实施例的保护范围，而是作为后面的详细说明的序言。

本申请实施例提供一种肺癌类器官培养液及其培养试剂组合和培养方法，以加快肺癌类器官细胞的生长，提高培养速度；而且体外培养的肺癌类器官更加仿生，能够保持器官的间质特性。

在一些实施例中，所述肺癌类器官培养液，包括完全培养基和自源条件培养基，所述完全培养基与所述自源条件培养基的体积比为1～3﹕1；其中，所述完全培养基包括条件培养基、基础培养基、复合抗生素和生长因子；所述条件培养基与所述基础培养基的体积比为1～4﹕1；所述基础培养基包括Advanced DMEM/F12，HEPES 5～15 mM和Glutamax 0.5x～1.5x；所述复合抗生素包括Primocin 50～500μg/mL，青霉素-链霉素0.5x～1.5x和甲硝唑2～10 μg/mL；所述生长因子包括：EGF 10～100 ng/mL，FGF-10 10～100 ng/mL，N2 0.25x～1.5x，B27 0.25x～1.5x，n-Acetylcysteine 1～2 mM， Nicotinamide 5～20 mM，Gastrin5～20 nM，Prostaglandin E2 0.2～2 μM，Y-27632 5～15 μM；所述条件培养基包括两种或三种蛋白条件培养基，其中所述蛋白条件培养基选自Wnt-3a条件培养基，R-spondin1条件培养基和Noggin条件培养基；自源条件培养基是利用肿瘤相关成纤维细胞培养基对肺癌组织提取的自源肿瘤纤维细胞进行培养获得；且所述自源条件培养基中至少包括自源生长因子、自源白介素因子、自源趋化因子，自源基质金属蛋白酶和自源其他因子；所述自源其他因子包括SDF1、VEGFA、TGFβ、PDGFα和PGE2。

在一些实施例中，所述肺癌类器官培养试剂组合，包括：酶解液和前述的肺癌类器官培养液；所述酶解液包括基础培养基、Ⅰ型胶原酶、Ⅲ型胶原酶和Primocin；其中，所述Ⅰ型胶原酶的浓度为0.1～2 mg/mL，所述Ⅲ型胶原酶的浓度为0.1～1 mg/mL，所述Primocin的浓度为0.2～2 mg/mL；所述肺癌类器官培养液与所述酶解液独立包装。