[发明专利]大脑皮层微血管和大血管RNA的纯化分离液及其分离方法

权利要求书

1.大脑皮层微血管和大血管RNA的纯化分离液，其特征在于，包括：

第一缓冲液、第二缓冲液和第三缓冲液；

其中，所述第一缓冲液包括4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES、RNA酶抑制剂和Hank's平衡盐溶液HBSS；

所述第二缓冲液包括葡聚糖和第一缓冲液，所述葡聚糖的分子量为65000～75000；

第三缓冲液包括动物血清和第一缓冲液。

2.根据权利要求1所述的纯化分离液，其特征在于，所述第一缓冲液中，所述Hank's平衡盐溶液HBSS为溶剂，所述4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES的终浓度为1％～5％；所述RNA酶抑制剂的终浓度为0.1％～0.5％。

3.根据权利要求1所述的纯化分离液，其特征在于，所述第一缓冲液中，所述RNA酶抑制剂选自焦碳酸二乙酯DEPC、异硫氰酸胍和氧钒核糖核苷复合物中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的纯化分离液，其特征在于，所述第二缓冲液中，所述第一缓冲液为溶剂，所述葡聚糖的质量百分比为150g/L～200g/L。

5.根据权利要求1所述的纯化分离液，其特征在于，所述第三缓冲液中，所述第一缓冲液为溶剂，所述动物血清的用量为1v/v％～10v/v％。

6.根据权利要求1所述的纯化分离液，其特征在于，所述第三缓冲液中，所述动物血清选自山羊血清及其白蛋白、驴血清及其白蛋白、牛血清及其白蛋白中的一种或多种。

7.大脑皮层微血管和大血管RNA的分离方法，其特征在于，包括：

步骤1、将大脑的皮质层置于第一缓冲液中，并将其剪碎和匀浆，然后进行离心，除去上清液得到皮质层匀浆沉淀；

步骤2、将所述皮质层匀浆沉淀与第二缓冲液混合，然后进行离心，除去上层的胶状物和上清液，得到大脑皮层血管沉淀；

步骤3、将所述大脑皮层血管沉淀与第三缓冲液混合，然后将混合液通过滤膜进行过滤，利用所述第三缓冲液冲洗并收集通过所述滤膜上的大脑皮层微血管，以及附着在所述滤膜上的大脑皮层大血管；

其中，所述第一缓冲液为权利要求1～6任意一项所述的纯化分离液的第一缓冲液；所述第二缓冲液为权利要求1～6任意一项所述的纯化分离液的第二缓冲液；所述第三缓冲液为权利要求1～6任意一项所述的纯化分离液的第三缓冲液。

8.根据权利要求7所述的分离方法，其特征在于，步骤1中，所述离心的温度为0～4℃，所述离心的离心加速度为2000～5000g，所述离心的时间为10～20分钟。

9.根据权利要求7所述的分离方法，其特征在于，步骤2中，所述离心的温度为0～4℃，所述离心的离心加速度为3000～5000g，所述离心的时间为15～30分钟。

10.根据权利要求7所述的分离方法，其特征在于，步骤3中，所述滤膜的孔径为20μm～100μm。