[发明专利]HER2靶向的增强型抗肿瘤NK细胞、其制备方法及其应用

说明书

本发明提出一种HER2靶向的增强型抗肿瘤NK细胞、其制备方法及其应用，属于抗肿瘤细胞领域，能够解决现有的增强型NK细胞治疗杀伤活性不足，还需要加入外源IL‑12，对人体产生副反应的技术问题。该技术方案中的HER2靶向的增强型抗肿瘤NK细胞能够同时表达HER2和IL‑12，通过HER2靶向肿瘤细胞，并自分泌IL‑12增强抗肿瘤能力；HER2靶向的增强型抗肿瘤NK细胞通过将IL‑12慢病毒和HER2‑CAR慢病毒共同感染NK‑92细胞，然后经过检测与鉴定试验制备得到。本发明能够应用于抗肿瘤药物制备方面，尤其是抗实体瘤药物制备。

技术领域

本发明属于抗肿瘤细胞技术领域，尤其涉及一种HER2靶向的增强型抗肿瘤NK细胞、其制备方法及其应用。

背景技术

HER2，又名ErbB2、NEU、CD340，其过度表达可导致细胞过度增殖和表型恶性转化。研究发现有30％的乳腺癌患者HER2基因过度表达，这类高表达的患者恶性程度高，易复发转移，鉴于HER2在正常细胞和肿瘤细胞中的表达水平有显著差异使其成为肿瘤免疫治疗的理想靶点。

近年来，基于NK细胞的CAR-NK疗法发展迅速，相较于CAR-T其具有先天独特的优势，比如，NK细胞不需要抗原预先致敏即可发挥极高的细胞杀伤活性，且不受主要组织相容性复合体(MHC)限制性；已报道的基于异体NK细胞的肿瘤免疫治疗均未见严重非可控移植物排斥宿主反应，表明异体NK细胞治疗的可行性；另外NK细胞相较于T细胞来说，更容易突破实体瘤的肿瘤微环境，对于实体瘤的治疗效果更显著。但是，CAR-NK细胞在进行治疗肿瘤时也存在一定缺陷，主要在于其在缺乏细胞因子信号的情况下，NK细胞无法扩增并增强其效应功能，缺乏抗肿瘤的持久性。

基于CAR-NK细胞存在的上述问题，研究发现白介素-12(简称IL-12)能激活NK细胞，促进其分泌γ-干扰素(IFN-γ)对肿瘤细胞进行杀伤，因此工程化HER2靶向的CAR-NK细胞组成性分泌IL-12是治疗实体瘤，增强NK持续杀伤效应的很好的策略。例如，专利申请WO2020051363A1公开了一种基于NK细胞的治疗组合物和方法，具体公开了采用IL-12靶向嵌合蛋白在体内或体外刺激NK细胞，促进NK细胞功能的方法，但是该方法的局限性在于IL-12体外刺激后除去IL-12再进行输注治疗，NK细胞的效果并不显著；而体内输注刺激时IL-12靶向嵌合蛋白可以依靠靶向作用到达肿瘤部位，但足够数量的NK细胞不一定能到达肿瘤的位置，进而导致治疗效果不显著。

因此，目前采用IL-12靶向嵌合蛋白刺激NK细胞的方式，其对增强肿瘤治疗效果并不显著，如何研发出一种能够直接靶向肿瘤进行杀伤作用的同时，杀伤效果显著且无需加入外源IL-12，从而避免全身注射所引起的副反应的增强型抗肿瘤NK细胞是解决上述问题的关键。

发明内容

本发明针对现有的增强型NK细胞治疗杀伤活性不足，还需要加入外源IL-12，对人体产生副反应的技术问题，提出一种HER2靶向的增强型抗肿瘤NK细胞、其制备方法及其应用。

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：

HER2靶向的增强型抗肿瘤NK细胞，能够同时表达HER2和IL-12，通过HER2靶向肿瘤细胞，并自分泌IL-12增强抗肿瘤能力；

所述HER2靶向的增强型抗肿瘤NK细胞通过将IL-12慢病毒和HER2-CAR慢病毒共同感染NK-92细胞，然后经过检测与鉴定试验制备得到。

在一实施方式中，所述IL-12慢病毒中包含人工合成的IL-12基因，所述人工合成的IL-12基因是将人的天然IL-12基因的p35亚基基因和p40亚基基因通过连接肽基因连接后得到，所述人工合成的IL-12基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其氨基酸序列如SEQID NO.2所示；