[发明专利]一种测定血浆中游离醛固酮含量的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种测定血浆中游离醛固酮含量的方法，其特征在于：使用试剂盒，包括以下步骤：

分别将校准曲线工作液和质控品工作液加入空白基质中，制备校准曲线样品和质控品样品；

分别将血浆样品、校准曲线样品和质控品样品超滤后，经液液萃取的步骤，制备上清液；

取上清液氮吹，用100 μL的30~50%甲醇水溶液复溶后，进行LC-MS/MS测定，得到游离醛固酮的含量；

所述LC-MS/MS：Waters Acquity 超高效液相色谱系统和Waters Xevo TQS串联质谱；色谱柱：ACQUITY UPLC® BEH C18，2.1×50 mm 1.7 μm；

所述超滤条件为分别在300~900 μL缓冲液中加入300 μL血浆样品、校准曲线样品或质控品样品，于37℃，2000 g离心1小时；

所述萃取参数为取500 μL超滤后的溶液加入30 μL内标和800 μL萃取剂 ，涡旋3 min，于4℃，12000 g离心2 min；

液相色谱条件为：进样器温度：4~15℃；柱温：40~50℃；洗脱梯度如下：

所述流动相A：0.5 mM氟化铵水溶液；

所述流动相B：甲醇溶液；

所述试剂盒包括以下组分：校准曲线溶液；质控品溶液；内标准品溶液；替代基质；活化剂；缓冲液；萃取剂；流动相；

所述萃取剂为甲基叔丁基醚；

所述缓冲液为4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液；

质谱条件为：多反应监测参数如下：

扫描模式：多反应离子监测；电离模式：负离子模式；电喷雾毛细管电压：-2.5 kV；锥孔气流速：150 L/Hr；锥孔电压：30 V；离子源温度：150℃；脱溶剂气流速：800 L/Hr；脱溶剂温度：550℃。

2.根据权利要求1所述的一种测定血浆中游离醛固酮含量的方法，其特征在于：所述校准曲线溶液和质控品溶液均为醛固酮溶于替代基质中；所述校准曲线工作液的浓度为0.2~5000 pg/mL；所述质控品工作液的浓度范围为5~200 ng/mL；所述内标准品溶液为氘代醛固酮溶于替代基质中，浓度为1 ng/mL；所述替代基质为纯水、甲醇或乙腈中的一种或几种。