[发明专利]一种利用数字PCR鉴定精液的方法及其专用试剂盒

权利要求书

1.一种用于鉴定精液的试剂盒，包括引物对891、逆转录引物891、水解探针891、引物对RNU6b、逆转录引物RNU6b和水解探针RNU6b；

引物对891由正向引物-891F和反向引物-891R组成；

水解探针891的5′末端具有荧光标记甲，3′末端具有非荧光淬灭基团；

引物对RNU6b由正向引物RNU6b-F和反向引物RNU6b-R组成；

水解探针RNU6b的5′末端具有荧光标记乙，3′末端具有非荧光淬灭基团；

所述逆转录引物891的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；

所述正向引物-891F的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；

所述反向引物-891R的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；

所述水解探针891的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示；

所述逆转录引物RNU6b的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示；

所述正向引物RNU6b-F的核苷酸序列如SEQ ID NO：8所示；

所述反向引物RNU6b-R的核苷酸序列如SEQ ID NO：9所示；

所述水解探针RNU6b的核苷酸序列如SEQ ID NO：10所示。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述荧光标记甲为HEX荧光标记；所述荧光标记乙为FAM荧光标记；所述非荧光淬灭基团为MGB探针的淬灭基团。

3.权利要求1或2所述的试剂盒的应用，为如下d1)或d2)：

d1)鉴定或辅助鉴定精液；

d2)检测或辅助检测待测样本中是否含有精液；

所述应用用于非疾病的诊断与治疗。

4.一种鉴定或辅助鉴定待测样本中是否含有精液的方法，包括如下步骤：

(a1)获得若干精液样本和若干非精液样本中的miR-891a-5p拷贝浓度和miR-891a-5p/RNU6b比值；所述miR-891a-5p/RNU6b比值为miR-891a-5p拷贝浓度和RNU6b拷贝浓度的比值；

所述非精液样本为月经血、外周血、唾液和阴道分泌液中的至少一种；

(a2)对步骤(a1)获得的miR-891a-5p拷贝浓度和miR-891a-5p/RNU6b比值进行ROC曲线分析，获得鉴定精液的miR-891a-5p最佳截断值和鉴定精液的miR-891a-5p/RNU6b比值最佳截断值；之后进行如下判断：

若待测样本的miR-891a-5p拷贝浓度低于阴性对照样本，则待测样本不含有精液；

若待测样本的miR-891a-5p拷贝浓度高于阴性对照样本且大于miR-891a-5p最佳截断值，则待测样本含有精液；

若待测样本的miR-891a-5p拷贝浓度高于阴性对照样本且为miR-891a-5p最佳截断值以下：当待测样本的log2(miR-891a-5p/RNU6b)＞log2(miR-891a-5p/RNU6b比值最佳截断值)时，则待测样本含有精液；当待测样本的log2(miR-891a-5p/RNU6b)≤log2(miR-891a-5p/RNU6b比值最佳截断值)时，则待测样本不含有精液；

所述方法用于非疾病的诊断与治疗。