[发明专利]一种基于双滚环分离检测外泌体的光学生物传感器在审
| 申请号： | 202210241161.4 | 申请日： | 2022-03-11 |
| 公开（公告）号： | CN114609104A | 公开（公告）日： | 2022-06-10 |
| 发明（设计）人： | 王玉;朱镜儒;黄加栋;刘素;郭志强;李倩茹;姚玉颖;李宗强;李静静;张清心;徐婉晴;朱志学 | 申请（专利权）人： | 济南大学 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人： | 牛芳 |
| 地址： | 250022 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 双滚环 分离 检测 外泌体 光学 生物 传感器 | ||
1.一种基于双滚环分离检测外泌体的生物传感器，其特征在于，包括：
核苷酸序列如SEQ ID NO: 1-10所示的模板CT1，模板CT2，Connector，DNA-chol，CP1，CP2，发夹探针H1，发夹探针H2，Reporter，crRNA，和Cas12a、T4 DNA连接酶；
所述DNA-chol的3’端修饰胆固醇；
所述Reporter的5’端和3’端分别连接荧光报告基团和荧光猝灭基团。
2.根据权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，所述滚环模板CT1、滚环模板CT2和T4 DNA连接酶用RCA1和RCA2代替，所述RCA1和RCA2的序列如SEQ ID NO: 12-13所示。
3.一种包含如权利要求1或2所述的生物传感器的试剂盒。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括缓冲溶液。
5.一种如权利要求1或2所述生物传感器或如权利要求3或4所述试剂盒检测外泌体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将滚环模板CT1和滚环模板CT2分别与primer混合在T4 DNA连接酶催化下制备滚环1和滚环2；
（2）将滚环1或滚环2在phi29聚合酶催化下以dNTP为底物制备RCA1或RCA2；
（3）将RCA1、RCA2、待测样品或外泌体标准品、DNA-chol、Connector混合，调节pH至6.0；然后加入发夹探针H1、发夹探针H2、Cas12a、crRNA和Reporter，混合均匀后孵育，检测荧光。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述primer的序列如SEQ ID NO: 11所示。
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