[发明专利]一种联合检测miRNA155和谷胱甘肽的荧光生物传感器

权利要求书

1.一种联合检测miRNA155和谷胱甘肽的荧光生物传感器，其特征在于，包括：

核苷酸序列如SEQ ID NO:1-4所示的连接探针L、挂锁探针P、DNAzyme链和报告探针H，Mg²⁺、phi29 DNA聚合酶、T4 DNA连接酶、dNTP；

所述挂锁探针P的5’端磷酸化；

所述DNAzyme链第39和40位碱基之间包含双硫键；3’端修饰反向dT；

所述报告探针H链5’端修饰荧光报告基团，第25位修饰荧光猝灭基团。

2.根据权利要求1所述的荧光生物传感器，其特征在于，所述连接探针L、挂锁探针P和T4 DNA连接酶以环状模板代替；

所述环状模板的构建方法，包括：将挂锁探针P与连接探针L在T4 DNA连接酶缓冲液中杂交，然后加入T4 DNA连接酶低温下反应，然后灭活T4 DNA连接酶；纯化后得环形模板。

3.根据权利要求1所述的荧光生物传感器，其特征在于，所述荧光生物传感器还包括缓冲溶液；所述缓冲溶液中包含Mg²⁺。

4.一种包含权利要求1-3任一所述的荧光生物传感器的检测miRNA155的试剂盒。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括miRNA155的标准样品。

6.一种采用权利要求1-3任一所述的生物传感器或者权利要求4或5所述的试剂盒检测miRNA155的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）连接探针L和挂锁探针P在T4 DNA连接酶的催化下获得环状模板；

（2）环状模板、Mg²⁺、phi29 DNA聚合酶、dNTP、DNAzyme链、报告探针H在缓冲液中30℃孵育；然后灭活phi29 DNA聚合酶；

（3）将待测样品或miRNA155的标准样品的系列浓度溶液、GSH加入步骤（2）的体系中，37℃下孵育，然后进行荧光检测。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，还包括制作miRNA155标准曲线和计算待测样品中miRNA155的步骤。

8.一种采用权利要求1-3任一所述的生物传感器或者权利要求4或5所述的试剂盒在检测GSH中的应用。