[发明专利]检测痕量雌激素、17-羟孕烯醇酮、醛固酮、硫酸脱氢表雄酮的前处理方法及检测方法

说明书

本发明公开了一种检测痕量雌激素、17‑羟孕烯醇酮、醛固酮、硫酸脱氢表雄酮的前处理方法及检测方法，前处理方法包括以下步骤：1)将待测样品和内标溶液混匀；2)加入磁珠，混匀，通过磁力架吸附磁珠，移除溶液；3)加入甲醇水，混匀，通过磁力架吸附磁珠，移除甲醇水溶液；4)加入甲醇水，混匀，通过磁力架吸附磁珠，移除甲醇水溶液；5)加入洗脱液，混匀，通过磁力架吸附磁珠，移取全部洗脱液，加入氨水稀释，混匀，离心。本发明能快速实现待测物分离，便于实现自动化，提高检测通量；避免了使用大量挥发性溶剂，环境友好；采用磁珠作为吸附剂分离目标物，可以增加接触面积，提高交换速率，提升富集效果，保证检测结果的平行性和均一性。

技术领域

本发明涉及临床质谱体外诊断技术领域，特别涉及一种检测痕量雌激素、17-羟孕烯醇酮、醛固酮、硫酸脱氢表雄酮的前处理方法及检测方法。

背景技术

在临床质谱体外诊断试剂中，检测血清中雌激素、17-羟孕烯醇酮、醛固酮、硫酸脱氢表雄酮常用的前处理方法有液液萃取法(LLE)、蛋白沉淀法(PPT)、固相萃取法(SPE)等。液液萃取法成本低、处理量大、操作简单，但去除内源性干扰物的能力较差，容易堵塞色谱柱及污染质谱仪器，同时实验中使用了挥发性强的试剂，对实验人员存在健康隐患；固相支持液液萃取法实验机理为液液萃取机理，产品形式为96孔板，同样也属于高成本的实验耗材，实验中需要使用大量挥发性强的有机试剂，对实验环境及人员均不友好。蛋白沉淀法操作简便、成本低、易于实施，但处理后的样本浓度会被稀释，不适用于浓度低的目标物和质谱响应偏低的情况，同时分析物可能会与蛋白发生共沉淀而损失，可能会导致灵敏度下降。固相萃取法可以提高分析物的回收率，更有效的将分析物与干扰组分分离，减少样品预处理过程，但萃取所用耗材成本较高，需要专业人员协助进行方法开发，同时处理结果易受装填工艺、流速等的影响。但需要指出的是，目前血清中雌激素、17-羟孕烯醇酮、醛固酮、硫酸脱氢表雄酮常用的前处理方法，受到人员、工艺操作等的影响，难以实现自动化，需要投入大量的人力和时间。

所以，现在需要一种更可靠的方案。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术中的不足，提供一种检测痕量雌激素、17-羟孕烯醇酮、醛固酮、硫酸脱氢表雄酮的前处理方法及检测方法。本发明使用了磁性固相萃取技术进行血清中雌激素、17-羟孕烯醇酮、醛固酮、硫酸脱氢表雄酮的前处理，藉由磁性微球(磁珠)的高比面积提供了巨大的接触面积，多孔结构实现了分析物的吸附分离，借助适当的磁体即可以实现磁性填料的分离，整个实验流程易于实现自动化；同时，该技术还保留了传统固相萃取高回收率、高选择性、高净化率等优点。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种检测痕量雌激素、17-羟孕烯醇酮、醛固酮、硫酸脱氢表雄酮的前处理方法，包括以下步骤：

1)将待测样品和内标溶液混匀；

2)向步骤1)得到的混合液中加入磁珠，混匀，通过磁力架吸附磁珠，移除溶液；

3)向步骤2)得到的产物中加入体积浓度为C₁的甲醇水，混匀，通过磁力架吸附磁珠，移除甲醇水溶液；

4)向步骤3)得到的产物中加入体积浓度为C₂的甲醇水，混匀，通过磁力架吸附磁珠，移除甲醇水溶液；

5)向步骤3)得到的产物中加入洗脱液，混匀，通过磁力架吸附磁珠，移取全部洗脱液，向洗脱液中加入氨水稀释，混匀，离心，得到处理后的待测样品，作为液相色谱串联质谱法检测的测试样本；其中，所述洗脱液为含有氟化铵的甲醇与甲基叔丁基醚的混合物。

优选的是，C₁为1％-20％。

优选的是，C₂为30％-60％。

优选的是，氨水的质量浓度为0.05-0.2％。