[发明专利]一种同时测定血清中三种游离雄激素含量的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种同时测定血清中三种游离雄激素含量的方法，所述雄激素为雄烯二酮、脱氢表雄酮和硫酸脱氢表雄酮，其特征在于：包括以下步骤：

包括先后使用超滤和液液萃取从血清样品中分离所述三种游离雄激素的步骤；

包括使用高效液相色谱串联质谱检测所述三种游离雄激素的步骤。

2.根据权利要求1所述的一种同时测定血清中三种游离雄激素含量的方法，其特征在于：所述超滤包括以下步骤：

在血清样品中加入缓冲液，静置，于4440℃，2000g离心1h。

3.根据权利要求1所述的一种同时测定血清中三种游离雄激素含量的方法，其特征在于：所述液液萃取包括以下步骤：

超滤后得超滤液，在所述超滤液中加入内标溶液和萃取剂，涡旋3min，于4℃，12000g离心5min。

4.根据权利要求1-3任一项所述的一种同时测定血清中三种游离雄激素含量的方法，其特征在于：

校准曲线溶液中，ASD的浓度为0.02410ng/mL；DHEA的浓度为14500ng/mL；DHEAS的浓度为1045000ng/mL；

质控品溶液中，ASD的浓度为0.145ng/mL，DHEA的浓度为54250ng/mL，DHEAS的浓度为5042500ng/mL；

ASD、DHEA和DHEAS的内标溶液分别为ASD-d7、DHEA-d6和DHEAS-d6，溶于替代基质中，浓度分别为1ng/mL、50ng/mL和500ng/mL。

5.根据权利要求4所述的一种同时测定血清中三种游离雄激素含量的方法，其特征在于：所述校准曲线溶液中，ASD、DHEA和DHEAS的浓度梯度如下所示：

所述质控品溶液中，ASD的浓度梯度为0.1、1、5ng/mL；DHEA的浓度梯度为5、50、250ng/mL；DHEAS的浓度梯度为50、500、2500ng/mL。

6.根据权利要求5所述的一种同时测定血清中三种游离雄激素含量的方法，其特征在于：所述高效液相色谱条件为：进样器温度：8℃；柱温：40℃；洗脱梯度如下：

所述流动相A：含氟化铵水溶液；

所述流动相B：含甲醇溶液。

7.根据权利要求6所述的一种测定检测血清中三种游离雄激素含量的方法，其特征在于：所述质谱条件为：多反应监测参数如下：

扫描模式：多反应离子监测；电离模式：正、负离子模式；正离子毛细管电压：3.0kV，负离子毛细管电压：-2.5kV；离子源温度：150℃；脱溶剂温度：550℃；脱溶剂气流速：800L/Hr。

8.一种同时测定血清中三种游离雄激素含量的试剂盒，所述雄激素为雄烯二酮、脱氢表雄酮和硫酸脱氢表雄酮，其特征在于：所述试剂盒包括以下组分：

校准品溶液；质控品溶液；内标准品溶液；替代基质；活化剂；缓冲液；萃取剂；流动相。

9.根据权利要求8所述的一种同时测定血清中三种游离雄激素含量的试剂盒，其特征在于：

校准溶液中，ASD的浓度为0.02410ng/mL；DHEA的浓度为14500ng/mL；DHEAS的浓度为1045000ng/mL；

质控品溶液中，ASD的浓度为0.145ng/mL、DHEA的浓度为54250ng/mL、DHEAS的浓度为5042500ng/mL；

内标准品溶液分别为ASD-d7、DHEA-d6和DHEAS-d6溶于替代基质中，浓度分别为1ng/mL、50ng/mL和500ng/mL。

10.根据权利要求8所述的一种同时测定血清中三种游离雄激素含量的试剂盒，其特征在于：所述萃取剂为乙酸乙酯、甲基叔丁基醚、正己烷、二氯甲烷中的一种或几种。