[发明专利]一种同时测定血清中三种游离雄激素含量的方法及试剂盒

说明书

本发明属于激素检测技术领域，涉及一种同时测定血清中三种游离雄激素含量的方法及试剂盒。针对现有高效液相色谱串联质谱技术检测血清中的ADS、DHEA和DHEAS时，对于多组分的测定需要大量的样品量和时间，且缺乏高质量游离态激素的测定手段，对由游离态激素的测定大多使用间接测试，基本手段为测量总激素以及蛋白总量，然后利用质量方程对游离态激素进行理论估算，其准确度不足，操作麻烦等技术问题，本申请提供一种同时检测血清中三种游离雄激素含量的方法，具有检出限低、准确度高、重现性好、耗时短的优点。本申请还提供了一种同时测定血清中三种游离雄激素含量的试剂盒，仅需300μL血清样品即可实现检测，操作快速简便。

技术领域

本发明属于激素检测技术领域，具体地，涉及一种同时测定血清中三种游离雄激素含量的方法及试剂盒。

背景技术

无论是成人，还是青少年和新生儿，类固醇激素的定量测定对于评估肾上腺和性腺功能、鉴别诊断和治疗药物监测都很重要，对诊断新生儿先天性肾上腺增生和类固醇合成缺陷尤为重要。许多实验室对雄激素的测定往往仅限于睾酮。为了更准确地评价两性雄激素的状况，测量其他雄激素，如雄烯二酮(ASD)、脱氢表雄酮(DHEA)和硫酸脱氢表雄酮(DHEAS)，可以更全面的了解女性体内最丰富的循环雄激素的信息。

ASD和DHEA由肾上腺和性腺产生，是体内合成雌激素和睾酮激素的重要前体。DHEAS在女性几乎全部来自肾上腺，在男性则有一些来自于睾丸，是最丰富的循环雄激素。ASD、DHEA和DHEAS的分泌随年龄变化，从青少年开始分泌，在20430岁达到顶峰，然后逐渐下降。因为这三种化合物有一半以上的产量来自自肾上腺，是指示肾上腺雄性激素产量的良好标志物。ASD、DHEA和DHEAS常一起作为女性高雄激素的初筛项目，高雄激素血症是多囊卵巢综合征女性(PCOS)的一个常见特征，同时存在少排卵和/或微多囊卵巢形态，则可确诊为PCOS。因此，将患者定义为高雄激素血症具有重要的临床意义。不幸的是，临床上和生理性高雄激素症的评估通常依赖于不准确的方法。

常规的雄激素检测方法为自动化学发光免疫法，对于低浓度的样品存在很大的高估，可能会对许多多囊卵巢综合征女性的表型进行错误的分类，在个体代谢风险的估计方面存在错误。大多数常规实验室用于评估这些激素的方法的敏感性和准确性都很差，尤其是在女性参考范围。该领域主要科学团体推荐的液相或气相色谱-质谱法和平衡透析法，通常只在研究实验室和一些临床实验室可用。如中国专利申请公布号CN114088859A，发明名称为“一种分离多组同分异构体并检测29种类固醇激素的方法”，公开了的方法提出了一种分离多组同分异构体并检测29种类固醇激素的方法，通过对超高效液相色谱的流动相和洗脱条件进行优化，使多组同分异构体得以分离，通过优化液相条件和质谱参数可以同时检测含量跨度在ng级至pg级的不同类固醇激素，实现了对样品中包含多组同分异构体在内的29种类固醇激素含量的同步检测，但依然存在检测限达不到检测游离ASD、DHEA和DHEAS的要求。此外，目前没有高质量的游离态化合物检测方法时，依赖于总化合物和性激素结合球蛋白测量，或游离雄激素指数或质量方程计算生物利用度分数计算游离态化合物的方法是不充分的。

发明内容

1、要解决的问题

针对现有高效液相色谱串联质谱技术检测血清中的ASD、DHEA和DHEAS时，采用免疫测定法只能对单个物质进行测定，对于多组分的测定需要大量的样品量和时间，且同时对多组分雄激素进行测定，缺乏高质量游离态激素的测定手段，对由游离态激素的测定大多使用间接测试，基本手段为测量总激素以及蛋白总量，然后利用质量方程对游离态激素进行理论估算，其准确度不足，操作麻烦的技术问题，本申请提供一种同时测的血清中三种游离雄激素含量的方法，具有检出限低、准确度高、重现性好、耗时短的优点。本申请还提供了一种同时测定血清中三种游离雄激素含量的试剂盒，仅需300μL血清样品即可实现检测，操作快速简便。

2、技术方案

为达到上述目的，提供的技术方案为：