[发明专利]用于检测Vero细胞基因组DNA的组合物、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种组合物，其特征在于，包括引物和探针，

所述引物包括：

上游引物序列：5’-CATCTCACAGAGTTACATCTTTCC-3’(SEQ ID NO:2)，

下游引物序列：5’-CTTTTTCACCATAGCCCTCTA-3’(SEQ ID NO:3)；

所述探针包括如下序列：5’-CCTTTCGCTAAGGCTGTTCTTGT-3’(SEQ ID NO:4)。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述探针序列具有锁核酸修饰；

任选地，所述探针序列5’端的第3位碱基具有锁核酸修饰。

3.根据权利要求1-2任一项所述的组合物，其特征在于，所述探针进一步携带荧光基团；

任选地，所述荧光基团选自下列中的至少之一：FAM、ROX、VIC、CY5、CY3、HEX、5-TAMRA、TET和JOE。

4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述探针的5’端标记荧光基团，3’端标记淬灭基团，

优选地，所述探针5’端标记FAM荧光报告基团，3’端标记BHQ1淬灭基团。

5.一种试剂盒，其特征在于，包含权利要求1-4任一项所述的组合物。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，进一步包括下列中的至少一种：PCR缓冲液、盐离子、dNTPs、DNA聚合酶或者靶标核酸；

任选地，进一步包括PCR增强剂；

任选地，所述DNA聚合酶为Taq酶；

任选地，所述盐离子为Mg²⁺。

7.根据权利要求5或所述的试剂盒，其特征在于，进一步包括下列试剂中的至少一种：DNA提取试剂和核酸纯化试剂。

8.一种检测Vero细胞基因组DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将待测样品在PCR扩增体系中进行扩增反应，所述PCR扩增体系中包括权利要求1-4任一项所述的组合物或利用权利要求5-7任一项所述的试剂盒配置的，

其中，所述待测样品包括Vero细胞基因组DNA；

任选地，所述待测样品是以Vero细胞的形式提供的；

任选地，所述待测样品预先经过Vero细胞基因组DNA提取处理；

任选地，在PCR扩增体系中进行扩增反应，以便获得靶标核酸的CT值；以及基于所述靶标核酸的CT值，确定待测样品中Vero细胞基因组DNA的水平；

任选地，所述靶标核酸包括SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的PCR扩增体系包括权利要求1-4任一项所述的组合物，其中，所述组合物中的上游引物、下游引物和探针的摩尔比为(13-16)：(13-16)：(12-15)；

优选地，所述上游引物、下游引物和探针的摩尔比为15：15：14。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增反应的条件依次为：90℃-97℃、0.8-1.5min，1个循环；90℃-97℃、3-10s，55-65℃、10-20s，38-42个循环。