[发明专利]一种鉴定甜菜筒喙象特异引物对及其应用有效
申请号: | 202210265836.9 | 申请日: | 2022-03-17 |
公开(公告)号: | CN114480677B | 公开(公告)日: | 2023-09-26 |
发明(设计)人: | 高晓勋;刘一景;孙凌;贾彦生 | 申请(专利权)人: | 吕梁市农业农村局;山西省植物保护植物检疫总站;柳林县农业农村局 |
主分类号: | C12Q1/6888 | 分类号: | C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11 |
代理公司: | 北京盛凡佳华专利代理事务所(普通合伙) 11947 | 代理人: | 孙莉莉 |
地址: | 033099 山西省*** | 国省代码: | 山西;14 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 鉴定 甜菜 筒喙象 特异 引物 及其 应用 | ||
1.一种检测甜菜筒喙象的特异性引物对,其特征在于,由SEQ ID NO:1所示的上游引物和SEQ ID NO:2所示的下游引物组成。
2.一种用权利要求1所述的特异性引物对检测甜菜筒喙象的PCR方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)待测样品DNA的提取;
(2)以所述待测样品的DNA为模板,采用权利要求1所述的特异性引物对对DNA模板进行PCR扩增;
(3)对上述扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测,根据电泳检测结果判定样品中DNA模板是否来源于甜菜筒喙象;若电泳结果显示在223bp处有单一DNA条带,则该样品为甜菜筒喙象;若未扩增出223bp的序列片段,则样品为其它物种。
3.如权利要求2所述检测甜菜筒喙象的PCR方法,其特征在于,所述PCR的反应体系:待测样品DNA 1μL;上游引物0.5μL;下游引物0.5μL;2×Taq PCRMasterMixⅡ12.5μL;无菌水10.5μL。
4.如权利要求2所述检测甜菜筒喙象的PCR方法,其特征在于,所述PCR的反应条件:95℃3min;95℃30s,61℃30s;72℃20s,共40个循环;72℃2min,4℃保存PCR产物。
5.如权利要求3所述检测甜菜筒喙象的PCR方法,其特征在于,上游引物和下游引物的摩尔浓度为10μM。
6.如权利要求3所述检测甜菜筒喙象的PCR方法,其特征在于,待测样品DNA的浓度不小于250pg/μL。
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