[发明专利]一种肿瘤“开关型”纳米光疗系统的制备方法及应用

说明书

本发明涉及肿瘤“开关型”纳米光疗系统的制备方法及应用，有效解决现有抗肿瘤光疗效率低的问题，转铁蛋白溶解于谷胱甘肽水溶液中，搅拌，使分子内二硫键S‑S打开，获得空间结构展开的转铁蛋白均质溶液；羟氯喹乙醇溶液滴加到转铁蛋白均质溶液中，搅拌；滴加亚碲酸钠水溶液，然后再使用氢氧化钠溶液调节pH，搅拌，转移至MWCO=100kD的透析袋，用超纯水透析除去游离药物，即得，本发明制备的Tf‑Te/HCQ纳米制剂粒径较为均一，可实现对肿瘤的天然靶向及在靶细胞内的选择性释药，显著提高光敏剂的光热转化和ROS生成效率，同时，装载的HCQ，可选择性抑制肿瘤细胞在光疗过程中被增强的自噬，发挥协同抗肿瘤效果。

技术领域

本发明涉及药物制剂领域，特别是一种肿瘤“开关型”纳米光疗系统的制备方法及应用。

背景技术

近年来，光疗（包括光热治疗PTT和光动力治疗PDT）因其具有高效、微创、低毒等显著优势，作为一种极具潜力的肿瘤治疗新模式，已被开发用于多种癌症的临床治疗。光疗是利用激光照射富集在肿瘤的光敏剂，产生局部高温或具有强细胞毒性的活性氧（ROS）杀伤肿瘤细胞。最新研究发现，肿瘤细胞在应激状态下会激活自噬。通过自噬启动细胞内循环，进行自我解毒，增强肿瘤细胞的抗性，抵抗PTT和PDT治疗。因而开发新型光敏剂，并同步抑制自噬所引发的治疗抵抗，是提高光疗抗肿瘤效率的新策略。

碲纳米颗粒因其具有良好的光热转换效率和光敏剂的特征，在抗肿瘤光疗领域具有较好的应用前景。但潜在的生物毒性及体内降解问题阻碍了其生物应用。如何提高纳米碲生物相容性是我们面临的重要挑战。

转铁蛋白是血浆中主要的含转铁蛋白质，且肿瘤细胞表面的转转铁蛋白受体（TfR）表达量远高于正常细胞，因此转铁蛋白对肿瘤细胞具有天然靶向性。另外，转铁蛋白还是一个优良的药物载体，其疏水空腔可以装载多种疏水性治疗药物。因此转铁蛋白在抗肿瘤治疗中具有其独特的优势。

羟氯喹（Hydroxychloroquine，HCQ）作为经典的自噬抑制剂，可通过诱导溶酶体脱酸，破坏溶酶体中酸性水解酶的活性，使自噬体中的受损物质无法降解，切断肿瘤细胞在严峻氧化应激状态下的自我保护途径，协同增强抗肿瘤光疗效果。但HCQ无组织和细胞选择性，如何精确狙击癌细胞，选择性抑制肿瘤细胞在光疗过程中被增强的自噬，发挥协同抗肿瘤效果，是当前迫切要解决的问题。

发明内容

针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本发明的目的就是提供一种肿瘤“开关型”纳米光疗系统的制备方法及应用，可有效解决现有抗肿瘤光疗效率低的问题。

本发明的技术方案是，一种肿瘤“开关型”纳米光疗系统的制备方法，具体步骤如下：

（1）将10-25mg的转铁蛋白溶解于2mL的浓度为6-20mM的谷胱甘肽水溶液中，在25-55℃条件下搅拌30-90min，分子内二硫键S-S打开，获得终浓度为5-12.5mg/mL空间结构展开的转铁蛋白均质溶液；将2.5-10mg/mL羟氯喹（Hydroxychloroquine，HCQ）乙醇溶液0.4mL滴加到上述的转铁蛋白均质溶液中，搅拌4-12h；

所述6-20mM的谷胱甘肽水溶液（又称GSH水溶液）的制备方法是，将4-12mg谷胱甘肽(Glutathione，GSH)溶解于2mL的超纯水中配制成；

（2）滴加2-8mg/mL的亚碲酸钠（Na₂TeO₃）水溶液1mL，然后再使用2M氢氧化钠（NaOH）溶液调节pH为7-14，25℃下搅拌4-12h，然后转移至MWCO=100kD的透析袋，用超纯水透析4-12h除去游离药物，即得肿瘤“开关型”纳米光疗系统（又称：基于二硫键重构的肿瘤“开关型”纳米光疗系统Tf-Te/HCQ）。

本发明通过二硫键重构技术将转铁蛋白的分子内二硫键转化为分子间二硫键，利用疏水空腔负载自噬抑制剂羟氯喹（HCQ），同步原位仿生矿化纳米碲（Tf-Te），即得Tf-Te/HCQ纳米光疗系统，Tf-Te/HCQ纳米光疗系统即为本申请肿瘤“开关型”纳米光疗系统。