[发明专利]用于测定氧化三甲胺的试剂盒及其制备方法和应用

说明书

本发明提供用于测定氧化三甲胺的试剂盒及其制备方法和应用，本发明提供的试剂盒能够有效解决溶液工艺制备的试剂盒稳定性不佳的现状，且能实现内标物的可冻干和长期稳定性。所述试剂盒包括系列氧化三甲胺校准品和氘代氧化三甲胺内标品；所述系列氧化三甲胺校准品为具有浓度梯度的系列氧化三甲胺校准品工作液的冻干物，所述系列氧化三甲胺校准品工作液为已知浓度的氧化三甲胺标准品溶液用基质溶液稀释而成的具有浓度梯度的氧化三甲胺校准品工作液；所述氘代氧化三甲胺内标品为已知浓度的氘代氧化三甲胺标准品溶液用基质溶液稀释而成的具有预定浓度的氘代氧化三甲胺内标品工作液的冻干物；基质溶液中的基质为血清白蛋白。

技术领域

本发明涉及内源性生物标志物的检测技术领域，特别涉及一种测定氧化三甲胺的试剂盒及其制备方法和应用。

背景技术

作为一种内源性生物标志物，氧化三甲胺（TMAO）也同其他的生物标志物（biomarker）一样，需要首先解决基质的干扰，才能确保定量的准确性。因此在选择合适的基质时，研发人员往往会采取2种主要方式：

1）扣除零浓度空白血基质，即选择混合血作为基质，将不同浓度的校准品、质控品分别与零浓度混合血基质相减，去掉混合血基质中本身存在的TMAO干扰，然后再进行曲线拟合以及开展样本的含量测定。这个做法虽然保证了基质的“原汁原味”，但忽略了样本间的TMAO含量存在显著差异，且混合基质也存在批间的不一致性的事实，加上混合人血基质的获得来源和伦理受到诸多限制，因此难以应用到如开发体外诊断试剂盒（IVD）的产业化上。该做法主要是用于实验室研发以及临床试验阶段，参考文献2即采用的该模式用于建立1种TMAO定量方法开发。

2）采用非血源的替代基质，通过选择血液中的高蛋白组分，如人血清白蛋白（HSA）、牛血清白蛋白（BSA）等作为替代基质，保证校准品、质控品的基质中不存在除TMAO标准品之外的其他内源性TMAO。同时，借助同位素标记的TMAO作为内标，可抵消替代基质与人源血基质之间的背景响应差异，从而真正意义上杜绝内源性TMAO的干扰，也可实现不同待测样本间的不同含量的TMAO被全部检出。此外，替代基质的来源易得，成分简单，质量易控，因此该做法常常用于生物标志物的IVD产品开发。参考文献1选择HSA作为替代基质，开发了TMAO的定量试剂盒，初始检验性能合格。综合来看，在产品开发中，替代基质的做法往往更容易保证TMAO的定量准确度。

由于替代基质基本属于蛋白类，容易受到温度、湿度等物理条件影响而发生降解、聚合、霉变等情况，因此品种、来源和纯度这些因素是在考察基质的稳定性时需重点考虑的。HSA和BSA作为最常使用的替代基质，在TMAO产品化中需要首先考察它们的稳定性，如采用37℃加速试验、冻融试验、复溶试验等极端条件来检验基质的稳定性对TMAO测定的精密度和准确度的影响。只有通过稳定性测试的基质，才能进一步用于TMAO产品的工艺开发中。即使获得稳定性好的基质时，面对不同工艺的处理，对待测物的影响也是截然不同的。

参考文献：

[1] 李晓辉，李莹，余鹏，等. 一种氧化三甲胺定量检测试剂盒及方法[P]，CN201710502265.5。

[2] 刘燕，谭栩颖，许斌，等. 血清中氧化三甲胺的高效液相色谱串联质谱法测定研究[J].华南预防医学，2015,41(3):207-212。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种用于测定氧化三甲胺的改进型试剂盒，该试剂盒能够有效解决溶液工艺制备的试剂盒稳定性不佳的现状，且能实现内标物的可冻干和长期稳定性。

本发明为达到其目的，提供如下技术方案：

本发明一方面提供一种用于测定氧化三甲胺的试剂盒，所述试剂盒包括系列氧化三甲胺校准品和氘代氧化三甲胺内标品；