[发明专利]一种肺癌早期智能诊断的多价可激活适配体探针及其制备与应用

权利要求书

1.一种S1适配体荧光探针S1-polyA，其特征在于，所述荧光探针为5’端标记有荧光报告基团的S1适配体，所述S1适配体的3’端连接有一段延伸的A碱基链，序列如SEQ ID NO.1所示：

GGTTGCATGCCGTGGGGAGGGGGGTGGGTTTTATAGCGTACTCAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(SEQ IDNO.1)。

2.根据权利要求1所述的S1适配体荧光探针S1-polyA，其特征在于：所述荧光报告基团选自HEX、FAM、Cy3、Cy5中的至少一种。

3.一种双链结构，其特征在于：所述双链结构包括如权利要求1～2任一项所述的荧光探针，还包括3’端标记有荧光淬灭基团的互补链S1-CP，所述荧光探针与所述互补链S1-CP部分互补形成双链结构，所述带有淬灭基团的互补链S1-CP的序列如SEQ ID NO.2所示：

CCACGGCATGCAACC(SEQ ID NO.2)。

4.根据权利要求3所述的双链结构，其特征在于：所述荧光淬灭基团选自BHQ1、BHQ2、BHQ3中的至少一种。

5.一种多价可激活适配体探针，其特征在于：包括长DNA连接支架，所述长DNA连接支架上偶联有若干个如权利要求1～2任一项所述的荧光探针S1-polyA，所述荧光探针S1-polyA与3’端标记有荧光淬灭基团的互补链S1-CP部分互补形成双链结构，所述带有淬灭基团的互补链S1-CP的序列如SEQ ID NO.2所示：

CCACGGCATGCAACC(SEQ ID NO.2)。

6.根据权利要求5所述的多价可激活适配体探针，其特征在于：所述荧光淬灭基团选自BHQ1、BHQ2、BHQ3中的至少一种；

和/或，将荧光探针S1-polyA、互补链S1-CP混合后加热至95℃反应10min，然后缓慢冷却至室温，再加入长DNA连接支架混匀反应，构建得到所述多价可激活适配体探针；

和/或，所述长DNA连接支架通过杂交链式反应合成，制备过程如下：将诱导链intiator、发夹结构hairpin1和hairpin2混合进行孵育，制得长DNA连接支架；

所述发夹结构hairpin1和hairpin2由hairpin1和hairpin2序列在95℃反应5分钟后缓慢降温到室温反应2小时，以充分形成发夹结构；

所述hairpin1、hairpin2和intiator的序列分别如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4和SEQID NO.5所示：

AATAAACCCACCACCCACCCAACGGGTGGGTTGGGTGGGTGGTGGGAGGTGAGGTGAAGTT(SEQ IDNO.3)；

TTTTTTTTTTTTTTTGTTGGGTGGGTGGTGGGTTTATTCCCACCACCCACCCAACCCACCC(SEQ IDNO.4)；

GTTGGGTGGGTGGTGGGTTTATT(SEQ ID NO.5)。

7.根据权利要求6所述的多价可激活适配体探针，其特征在于：长DNA连接支架与荧光探针S1-polyA的浓度比为1：10，荧光探针S1-polyA与带有淬灭基团的互补链S1-CP的浓度比为1：(0.5～4)；

和/或，孵育温度为25℃；

和/或，孵育时间为0.5～24h；

和/或，将50nM～1000nM诱导链intiator与5μM hairpin1和5μM hairpin2混合进行孵育，制得长DNA连接支架。

8.一种根据权利要求5～7任一项所述的多价可激活适配体探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

将荧光探针S1-polyA、互补链S1-CP混合后加热至95℃反应10min，然后缓慢冷却至室温，再加入长DNA连接支架混匀反应，构建得到所述多价可激活适配体探针。