[发明专利]一种肺癌早期智能诊断的多价可激活适配体探针及其制备与应用

说明书

本发明属于生物医药诊断检测技术领域，具体公开了一种肺癌早期智能诊断的多价可激活适配体探针及其制备与应用。所述荧光探针为S1适配体核酸序列5’端带有polyA尾，并标记荧光基团，其与3’端标记有荧光淬灭基团的互补链S1‑CP部分互补形成双链结构；将长DNA连接支架与S1‑polyA、S1‑CP混合反应可构建得到一种多价可激活适配体探针。本发明构建的肺癌早期智能诊断的多价可激活适配体探针制备方法简便，省时且高效；对靶标具有更强的结合亲和力和高特异性；不易受到核酸酶攻击，具有良好的生物稳定性。采用本发明的多价可激活适配体探针检测肺腺癌细胞时，具有高灵敏度和高成像对比度。

技术领域

本发明涉及生物医药诊断技术领域，特别是涉及一种肺癌早期智能诊断的多价可激活适配体探针及其制备与应用。

背景技术

目前，癌症(恶性肿瘤)严重威胁着人们的生命健康，肺癌早期阳性检出率低是重大科学问题。根据世界卫生组织2020年最新癌症报道，肺癌仍然是癌症死亡的最常见原因，肺癌死亡的病例高达180万例。肺癌导致了巨大的医疗负担，不仅是全球主要死因之一，也是阻碍人类期望寿命延长的重要因素。肺腺癌是肺癌最常见的组织学类型，占肺癌的40％以上。由于大多数肺腺癌病例是在晚期被发现，导致死亡率较高，因此提高肺腺癌的早期检出率是提高其五年生存率的有效途径。

目前，临床上常采用影像学方法、传统血液肿瘤标志物检测等对肺癌进行早期诊断，无疑存在许多缺陷，诊断效果并不理想，且多数影像学方法灵敏度较差，诊断出的肺癌患者多属于中晚期，往往错过了手术治疗的最佳时期。例如，X线作为最早的影像学检查手段，在癌症筛查中有一定意义，但其假阴性率较高，对于早期肺癌容易漏诊；磁共振(MRI)影像和低剂量螺旋CT(LDCT)具有较高的空间分辨率，可有效鉴别病灶的形态特征，但同时存在过度诊断的缺陷，而且成本更高，给患者带来经济负担与心理负担，并不普遍适用于临床。传统的血液肿瘤标志物检测也常因缺乏准确的可靠的标志物，导致该方法诊断早期癌症的灵敏度和特异性不高。

病理学检查仍然是肺癌诊断的金标准，但组织病理检查存在取材困难、有创等缺点。采用微创方法如超声内镜引导下的经支气管针吸活检(EBUS-TBNA)、超声引导下经胸细针穿刺获取肿瘤组织以及寻找胸腹水、纤支镜灌洗液中的脱落细胞可以作为新的诊断手段，但这些微创方法只能获取少量标本，对肺癌早期患者准确得出诊断结果具有一定的困难。

细胞学快速现场评价(C-ROSE)是一种快速初步诊断的有效辅助技术。然而，临床样本中复杂的环境导致检测样本中肺癌细胞的过程非常困难，即使是训练有素的病理学家也很难在细胞学标本中识别出正常细胞混合物中的低丰度癌细胞。传统的分析技术，如免疫细胞化学、免疫组织化学和流式细胞术等，由于其通过生物识别分子(如抗体)在细胞学水平检测肺癌细胞的灵敏度差且检测周期长，不符合床旁诊断的要求。因此，在细胞学诊断中开发一种快速、简便、灵敏的肺癌早期诊断工具显得尤为重要。

近年来，基于核酸适配体的分析方法受到科学家的广泛关注。核酸适配体是通过配体指数富集系统进化技术在体外筛选得到的单链DNA或RNA寡核苷酸片段，可高特异性结合蛋白质、小分子，甚至细胞。随着以细胞为靶标的SELEX技术的不断进步，越来越多的肿瘤细胞的特异性核酸适配体被筛选出来，为癌症的诊断和治疗提供了一种新型的分子探针。在实际应用中，易化学合成、结构设计多功能性和低成本的优势使得适配体非常适合癌症生物标志物发现、检测和癌症成像。但由于单价核酸适配体可能存在与靶标结合不牢固的缺点，导致检测和治疗效果不佳，限制了其在检测和治疗应用中的发展。因此，构建多价核酸适配体是一种有效提高核酸适配体在分析检测和临床治疗等领域的应用价值的策略。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种肺癌早期智能诊断的多价可激活适配体探针及其制备与应用，以实现对肺腺癌细胞的高灵敏度、高特异性检测。