[发明专利]一种星油藤脱毒苗的培养方法在审
| 申请号： | 202210281740.1 | 申请日： | 2022-03-21 |
| 公开（公告）号： | CN114586685A | 公开（公告）日： | 2022-06-07 |
| 发明（设计）人： | 韦敏;梁钧淞;吴敏裕;李彩凤;宁孟;方源;朱格格;陈彤;何钦霞 | 申请（专利权）人： | 玉林师范学院 |
| 主分类号： | A01H4/00 | 分类号： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 广州海心联合专利代理事务所(普通合伙) 44295 | 代理人： | 马赟斋 |
| 地址： | 537000 广西*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 星油藤 脱毒 培养 方法 | ||
1.一种星油藤脱毒苗的培养方法，其特征在于包括以下工艺步骤：
(1)不定芽诱导：选取星油藤植株6～8cm茎尖为外植体，经75％乙醇消毒10s，用无菌水洗涤5次后，置于0.1％升汞溶液中浸泡6min，再用无菌水洗涤6次，经无菌滤纸吸干水珠后切成2～3cm的带节茎段，接种到不定芽诱导培养中，于25℃条件下黑暗培养至形成不定芽，所述的不定芽诱导培养基为MS+0.1～0.5mg/L TDZ+1.0～2.0mg/L 6-BA+0.1～0.5mg/LNAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8；
(2)脱毒处理：在无菌条件下，用灭菌的不含琼脂的不定芽诱导培养基中浸泡无菌滤纸10～20min，并将其平铺于无菌培养瓶中，再将步骤(1)获得的不定芽紧贴滤纸上，置于40～45℃条件下黑暗培养3～5d，剥取新生不定芽0.5cm的茎尖，并接种于不定芽诱导培养基中，于每天光照12～15h，光照强度为1500～2000lx，培养温度为25℃条件下培养20～30d形成新的不定芽；再用灭菌的不含琼脂的不定芽诱导培养基中浸泡无菌滤纸10～20min，并将其平铺于无菌培养瓶中，再将新形成的不定芽紧贴滤纸上，置于40～45℃条件下黑暗培养3～5d，剥取新生不定芽0.2cm的茎尖，并接种于不定芽诱导培养基中，于每天光照12～15h，光照强度为1500～2000lx，培养温度为25℃条件下培养20～30d形成新的不定芽；
(3)增殖培养：将步骤(2)获得的不定芽从基部切下并接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后置于每天光照12～15h，光照强度为1500～2000lx，培养温度为25℃条件下培养，每20～30d转接一次；所述的增殖培养基为MS+1.0～2.0mg/L 6-BA+0.1～0.5mg/L NAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8；
(4)生根培养：将步骤(3)获得的长至2～4cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25℃条件下黑暗培养3～5d，然后置于每天光照12～15h，光照强度为2000～3000lx，培养温度为25℃条件下培养至生根；所述的生根培养基为1/2MS+0.1～0.5mg/LIBA+1.0～2.0mg/L GGR+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8；
(5)炼苗移栽：将步骤(4)获得的生根幼苗在混合基质中栽培成苗即得星油藤脱毒苗；所述混合基质为由比例8:1:1的泥炭土、农家肥、河沙混合而成的基质。
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